一、吸烟对大鼠血清及肺组织谷胱甘肽S-转移酶活性的影响（论文文献综述）
赵利芳[1]（2021）在《大气PM2.5及其它污染因子致肺损伤分子机制研究》文中指出细颗粒物(PM2.5)是近年来研究较多的主要大气污染物。它与哮喘、慢性阻塞性肺炎和肺癌等密切相关,已被国际癌症研究机构（IARC）确定为一类致癌物。PM2.5中有机成分硝基多环芳烃（NPAHs）因具有致突性和致癌性被广泛关注。二氧化硫（SO2）也是常见大气污染物,会刺激呼吸道,引发肺炎和哮喘等疾病。此外,大气中生物组分内毒素,也称作脂多糖（LPS）,与哮喘发作、肺损伤有关,其对公众健康的危害也受到学者重视。《健康中国行动（2019-2030年）》提出要防治重大疾病,改善环境质量,保障民生健康。围绕此重大需求,本研究以大气重要组分PM2.5为主,探讨气道滴注太原大气PM2.5与其有机组分NPAHs暴露、太原真实环境大气PM2.5暴露、气道滴注太原大气PM2.5和SO2动态吸入复合暴露、临汾真实环境大气PM2.5和腹腔注射LPS复合暴露对肺损伤的毒性效应,进而揭示三种大气组分致肺部相关疾病的毒理机制。主要包括以下内容:1、研究太原市大气PM2.5及其有机组分NPAHs典型代表物1-硝基芘（1-NP）和9-硝基蒽（9-NA）对肺DNA损伤的效应。研究发现,PM2.5暴露会引起DNA损伤,但PM2.5中1-NP和9-NA是否会损害DNA以及这两种物质对PM2.5毒性是否有贡献有待深入研究。本章研究对雄性Wistar大鼠分别气道滴注二甲基亚砜（DMSO）、PM2.5（1.5mg/kg b.w.）混悬液、1-NP低中高浓度染毒液(1-NP-1:1.0×10-5 mg/kg b.w.、1-NP-2:4.0×10-5 mg/kg b.w.和1-NP-3:1.6×10-4mg/kg b.w.)和9-NA低中高浓度染毒液(9-NA-1:1.3×10-5mg/kg b.w.、9-NA-2:4.0×10-5 mg/kg b.w.和9-NA-3:1.2×10-4mg/kg b.w.)。隔天滴注1次,连续10天。采用彗星实验（Comet assay）观察大鼠肺细胞DNA链损伤情况,利用SDS-KCl沉淀法测定大鼠肺组织中DNA-蛋白交联（DPC）率,并通过酶联免疫吸附法（ELISA）考察DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷（8-OHd G）、氧化应激因子（血红素氧合酶1（HO-1）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD））和代谢酶（谷胱甘肽S-转移酶（GST）、细胞色素P450（CYP450）、细胞色素P4501A1（CYP1A1）和细胞色素P4501A2（CYP1A2））表达量。利用实时定量PCR（RT-PCR）和蛋白免疫印迹技术（WB）检测大鼠肺组织DNA损伤修复相关因子（8-氧鸟嘌呤DNA糖基化酶（OGG1）、8-羟基鸟嘌呤核苷酸（MTH1）和x射线修复交叉互补群1（XRCC1））变化。结果表明PM2.5、1-NP和9-NA能通过影响DNA修复能力,增强氧化应激和生物转化而诱导DNA损伤。另外,Pearson相关分析发现在剂量近似相等的条件下,1-NP中浓度和PM2.5、9-NA中浓度和PM2.5引起肺DNA损伤标志物表达变化有相关性。提示1-NP和9-NA在PM2.5致肺DNA损伤中起到一定贡献。此研究结果为PM2.5中NPAHs的肺毒理学机制研究提供了实验依据。2、从DNA甲基化角度深入研究了太原真实环境大气PM2.5暴露对肺DNA损伤的影响。研究证实,DNA甲基化与DNA损伤有相关性,但真实环境大气PM2.5暴露致肺DNA损伤的修饰机制还不清楚。本章研究采用PM2.5全身吸入式暴露系统,对雄性SD大鼠进行山西省太原市环境大气PM2.5吸入暴露1个月和2个月。采用苏木精-伊红（HE）染色分析大鼠肺部病理特征,结合ELISA、WB和RT-PCR技术检测炎症因子（肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6））、氧化应激相关因子（羟基自由基（HO·）、超氧阴离子自由基（O2-·）、NO、诱导型一氧化氮合酶（i NOS）、MDA、SOD和GST）、DNA损伤修复相关因子（DNA损伤诱导基因153（GADD153）、8-OHd G和磷酸化组蛋白H2AX（γ-H2AX））和癌症相关因子（原癌基因c-fos、c-jun和抑癌基因PTEN）表达。为深入研究DNA损伤机制,采用亚硫酸氢盐测序法测定OGG1和MTH1启动子区DNA甲基化状态。结果表明,1月和2月PM2.5实时吸入暴露能对大鼠肺部造成病理损伤和DNA损伤,并影响炎症因子、氧化应激相关因子和DNA损伤修复基因（MTH1和OGG1）表达。此外,2个月PM2.5暴露显着降低了OGG1启动子区2的DNA甲基化水平。这提示DNA损伤与氧化应激有关,且OGG1启动子区DNA甲基化水平改变可能是PM2.5致大鼠肺遗传毒性的一个重要机制。最后,通过分析c-fos、c-jun和PTEN表达结果,发现PM2.5实时吸入暴露能引起癌症相关的及早基因和抑癌基因表达异常,有增加肺癌风险的潜在可能。此研究结果为PM2.5对表观遗传学修饰的影响提供了一定参考价值。3、从炎症通路角度分析了PM2.5和SO2复合暴露对肺损伤的机制。PM2.5和SO2是两种较常见的大气污染物。研究发现,它们单独暴露分别能增加肺部疾病发病率。山西省太原市大气污染以煤烟型污染为主,PM2.5和SO2是主要的煤炭燃烧产物。二者复合暴露的毒性效应对阐释大气污染致肺毒性的机制有重要意义。因此,本章研究将雄性Wistar大鼠随机分为6组:对照组（隔天气道滴注生理盐水）,SO2吸入组（隔天动态吸入5.6 mg/m3 SO2）,PM2.5暴露组(隔天滴注1.5 mg/kg b.w.PM2.5),SO2和PM2.5低、中、高浓度联合暴露组(隔天吸入5.6 mg/m3SO2,并同时分别滴注1.5、6.0和24.0mg/kg b.w.PM2.5)。每次吸入SO2时间为6 h,滴注或吸入在同一天进行,连续10天。通过HE染色观察不同处理组大鼠肺组织病理损伤程度,结合透射电子显微镜（TEM）观察肺组织超微结构变化,利用瑞氏-吉姆萨染色法计数肺泡灌洗液（BALF）中炎性细胞数量,并通过ELISA考察细胞因子（TNF-α、IL-6和白介素1β（IL-1β））和炎症通路相关因子（核因子κB（NF-κB）抑制蛋白α（IκBα）、NF-κB抑制蛋白激酶β（IKKβ）和i NOS）改变。利用RT-PCR和WB技术检测大鼠肺组织细胞间黏附分子1（ICAM-1）、NF-κB、磷酸化p38（p-p38）和Toll样受体4（TLR4）表达水平。结果表明,SO2单独暴露未引起大鼠肺部明显炎症反应。PM2.5暴露增加了BALF中炎性细胞数目和炎症损伤。重要的是,与对照组/SO2组相比,SO2和PM2.5（1.5、6.0和24.0 mg/kg b.w.）复合暴露导致大鼠肺部出现明显病理损伤和超微结构损伤,并诱导BALF部分炎症细胞数量增多,激活了炎性通路TLR4/p38/NF-κB相关因子的异常表达,最终引起肺损伤。此研究为了解PM2.5与SO2协同加重肺部疾病的毒理学机制提供了更多理论依据。4、从铁死亡和组织纤维化角度研究了临汾真实环境大气PM2.5和LPS复合暴露对肺损伤的影响。PM2.5和内毒素普遍存在于大气中。研究表明,铁死亡与呼吸系统疾病发生有关,且PM2.5和LPS单独暴露均能引起铁死亡,但关于二者复合暴露影响肺组织铁死亡和纤维化相关因子表达的研究还很缺乏。本章研究将雄性BALB/c小鼠随机分为4组:洁净空气暴露组（注射PBS缓冲液）、PM2.5暴露组（注射PBS缓冲液）、LPS暴露组（注射LPS溶液）及PM2.5和LPS复合暴露组（注射LPS溶液）。采用腹腔注射方式对小鼠进行PBS缓冲液或LPS溶液（0.12 mg/mL）处理,每周注射1次,每次注射50μL。同时,采用PM2.5全身吸入式暴露系统对小鼠进行山西省临汾市真实环境大气PM2.5吸入暴露23周。通过HE染色观察不同组小鼠肺病理损伤程度,并采用ELISA技术考察炎性因子（TNF-α和IL-6）、氧化应激相关因子（SOD、谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢酶（CAT）、MDA和4-羟基壬烯醛（4-HNE））和Fe2+水平的改变。利用WB技术检测小鼠肺组织中铁死亡指标（谷胱甘肽过氧化酶4（GPX4）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）和膜铁转运蛋白1（FPN1））和纤维化相关因子（α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、胶原蛋白I（Collagen I）和胶原蛋白III（Collagen III））水平。通过Masson实验测定小鼠肺组织胶原含量变化。结果表明,与对照组/LPS组/PM2.5组相比,PM2.5和LPS复合暴露可加重肺病理损伤,引起炎性因子和氧化应激相关指标异常表达,诱导铁离子水平增加,导致铁死亡相关因子（GPX4、SLC7A11和FPN1）表达下降,4-HNE和MDA累积,诱导铁死亡发生。此外,复合暴露使肺沉积了大量胶原介质,引起纤维化相关因子表达显着增加。PM2.5和LPS单独暴露未引起这些因子明显改变。此研究揭示了PM2.5与LPS协同暴露致小鼠肺组织发生铁死亡和纤维化的毒理机制。不同地区大气污染多样,PM2.5组分复杂,且不同地区不同污染成分引起的呼吸系统疾病机制不同。鉴于此,本研究选择山西省污染较严重的太原市和临汾市为研究现场,建立了各种动物暴露模型。针对不同的PM2.5暴露模式,首先研究PM2.5及其吸附的NPAHs致肺DNA损伤效应,然后从DNA甲基化角度探讨PM2.5对肺DNA损伤的分子机制。之后建立PM2.5与SO2复合暴露模型,以炎症经典通路为主,研究不同浓度PM2.5和SO2复合暴露诱导大鼠肺炎症损伤的分子机制。最后,建立PM2.5和LPS复合暴露模型,阐明其对小鼠肺组织铁死亡和纤维化相关指标的影响。综上,本研究多维度研究了大气三种污染物染对肺部疾病的损伤效应。进一步为我国典型地区大气环境污染与健康领域研究的发展提供新的实验依据。
黄培炜[2]（2021）在《基于氧化应激及炎症反应探讨尺泽穴位注射NS对COPD大鼠的作用机制》文中进行了进一步梳理目的:观察尺泽穴位注射生理盐水（normal saline,NS）对慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）模型大鼠的肺组织形态学、肺功能的改善作用,从炎症反应、氧化应激的角度分析其作用机理;从Nrf2/ARE通路探讨其可能的作用机制。为临床针灸治疗COPD提供一定的科学依据。方法:1.分组与造模:将24只SD大鼠随机分为正常对照组（正常组,n=8）和模型实验组（n=16）,适应性饲养1周后,开始对模型实验组进行造模（采用烟熏+脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）气道滴注）,共11周。于第8周开始,将模型实验组分为模型对照组（模型组,n=8）、尺泽干预组（尺泽组,n=8）,并继续造模;2.干预:于第8周分组结束后立即进行干预:尺泽组于每日造模后取单侧尺泽穴注射NS0.1 ml,直刺0.5 mm,1次/日,左右轮流,连续干预4周。模型组每日同等造模同时固定抓取,不干预;3.指标观察:实验期间,大鼠每周称体重并记录,观察一般情况。干预结束后,大鼠禁食18h,麻醉,采用四道生理记录仪检测肺通气功能。剖腹,腹主动脉采血5 ml,余血尽量放尽,全血离心,取血清。打开胸腔,观察气管、肺组织大体外观,取下右肺固定处组织块冰上匀浆,测血清、肺组织超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）,ELISA法测血清、肺组织IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α）的含量。取下右肺叶固定处组织固定于4%多聚甲醛中,包埋、切片、HE染色,行病理形态学观察。另取左肺固定处黄豆大小肺组织2块,液氮转-80℃冻存,测肺组织Nrf2、HO-1、GSTm的m RNA和蛋白的表达。结果:1.一般情况:与正常组比,模型组大鼠体重下降（P﹤0.05）,毛色发黄暗淡;尺泽穴位注射NS干预后,体重明显提高（P﹤0.05）;2.肺功能:与正常组相比,模型组大鼠肺通气功能（每分通气量）均下降（P﹤0.05）,肺弹性阻力有下降趋势;尺泽穴位注射NS干预后,肺通气功能（每分通气量、肺弹性阻力）明显提高（P均﹤0.05）;3.肺组织形态学:与正常组相比,模型组肺组织外观、气管呈肺气肿改变及炎性细胞浸润,尺泽组的肺、气管组织外观、病理形态明显改善;4.炎症、氧化应激因子:与正常组相比,模型组血清和肺组织的IL-6、IL-8、TNF-α含量均明显升高（P均﹤0.01）MDA的含量有升高的趋势,血清SOD活力下降（P﹤0.05）,肺组织的SOD活力有下降趋势;尺泽穴位注射NS干预后,血清的IL-6、IL-8、TNF-α的含量有下降（P均﹤0.01）,肺组织的IL-8、TNF-α的含量下降（P均﹤0.01）,肺组织的MDA的含量下降（P﹤0.05）,血清MDA含量有下降趋势,肺组织IL-6有下降趋势,血清和肺组织的SOD活力上升（P均﹤0.05）;5.Nrf2、HO-1、GSTm基因、蛋白的表达:与模型组比,尺泽组Nrf2 m RNA表达明显上升（P﹤0.05）,HO-1蛋白表达明显下降（P﹤0.05）明显,GSTm的m RNA、蛋白均呈上升趋势。结论:1.尺泽穴位注射对COPD模型大鼠具有一定的防治作用。2.尺泽穴位注射防治COPD的作用可能与抗氧化应激、抗炎有关。3.尺泽穴位注射防治COPD所发挥的抗炎、抗氧化作用,与调节Nrf2/ARE通路中的Nrf2基因及HO-1蛋白有关。
陈理达[3]（2021）在《阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征与肝损伤的相关性及机制研究》文中研究说明目的:阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS）是一类较为常见的睡眠呼吸障碍,其可引起全身多个系统、多个器官损害。有一些研究报道肝脏也是其系统性损害的靶器官之一。然而OSAHS往往合并肥胖,而肥胖也是肝损伤的重要危险因素,因此有些研究结果提示在校正肥胖等混杂因素后,两者之间并没有相关性。总的来说,大部分与此相关的临床研究样本量较小,研究的结论也并不一致。动物研究表明慢性间歇低氧（chronic intermittent hypoxia,CIH）可导致肝损伤、肝脏氧化应激指标升高,提示氧化应激可能参与OSAHS相关肝损伤,但其内在确切的机制尚不明确。铁死亡是一种由铁积累的伴有脂质过氧化的调节性细胞死亡方式。铁死亡参与肝脏、心脏、肾脏缺血/再灌注损伤的病理生理过程。OSAHS中出现反复的缺氧/复氧,这与缺血/再灌注的病理生理过程相似。因此我们推测OSAHS相关肝损伤中可能存在铁死亡这一调节性死亡程序,并且可能存在相关机制的失调从而诱导铁死亡。因此本课题主要是研究OSAHS与肝损伤的相关性以及相关机制。主要通过收集分析大样本量的临床资料,分析OSAHS与肝损伤的相关性;其次在动物以及细胞水平探讨铁死亡在CIH诱导的肝损伤中的作用及潜在分子机制。方法:1.搜集2015年11月至2019年11月期间因睡眠时打鼾伴或不伴有呼吸暂停、白天嗜睡等症状到我们睡眠中心就诊的患者1085例,将其分为对照组、轻中度OSAHS组和重度OSAHS组。以血清肝功能评估肝损伤。利用Spearman相关分析睡眠参数与肝损伤相关性,多因素Logistic回归分析肝损伤的独立危险因素。对这些临床资料根据是否肥胖、性别、年龄进一步分层分析,探讨不同亚组中OSAHS与肝损伤的相关性。2.将14只SD雄性大鼠随机分成常氧对照（normoxia control,NC）组和CIH组,CIH组大鼠暴露于间歇性低氧（intermittent hypoxia,IH）8周。检测两组大鼠血清谷丙转氨酶（alamine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）水平,肝脏以及血清丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平,肝组织行苏木精-伊红染色并显微镜下观察,蛋白质印迹法检测肝脏中缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）,核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2）,酰基辅酶A合成酶长链家族成员4（Acyl-Co A synthetase long-chain family member 4,ACSL4）和谷胱甘肽过氧化酶4（glutathione peroxidase 4,GPX4）的蛋白表达水平。3.构建IH BRL-3A肝细胞模型,观察不同IH暴露时间细胞活力情况。选择合适的IH暴露时间用于进一步的细胞实验。铁死亡利用CCK8检测细胞活力,检测脂质活性氧（reactive oxygen species,ROS）、总Fe含量,蛋白质印迹法检测GPX4和铁蛋白重链多肽1（ferritin heavy chain 1,FTH1）来评估。肝细胞给予铁死亡抑制剂Ferrostatin-1处理,在IH暴露后,评估铁死亡情况。构建Nrf2沉默稳转株,在IH暴露后,评估铁死亡情况。4.将24只C57雄性小鼠随机分成NC组、CIH组、CIH+N-乙酰半胱氨酸组（N-acetylcysteine,NAC）。CIH组暴露IH时间为12周。检测两组大鼠血清ALT、AST水平,肝脏以及血清MDA、谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平,肝组织总Fe含量,肝组织行苏木精-伊红染色并显微镜下观察,蛋白质印迹法检测肝脏中Nrf2、FTH1、GPX4的蛋白表达水平。结果:1.肝功能指标包括ALT、AST、ALT/AST、γ-谷氨酰转肽酶值随着AHI严重程度增加呈显着性升高（p<0.05）,而总胆红素、碱性磷酸酶在各组中比较没有明显差异（p>0.05）。Spearman相关分析显示氧减饱和度指数（oxygen desaturation index,ODI）、呼吸暂停低通气指数（apnea hyponea index,AHI）、血氧饱和度<90%睡眠时间比（the percentage of sleep time with Sp O2<90%,T90%）、最低血氧饱和度（lowest oxyhemoglobin saturation,La SO2）、平均血氧饱和度（average oxyhemoglobin saturation,average Sp O2）均与ALT、AST呈显着性相关。多因素Logistic回归结果显示较高的身体质量指数（body mass index,BMI）、甘油三酯、空腹血糖以及OSAHS是肝损伤的独立危险因素。在对相关混杂因素校正后,轻中度OSAHS肝损伤发生风险较对照组增加0.705倍（OR=1.705,95%CI=1.105-2.631,p=0.016）,重度OSAHS肝损伤发生风险较对照组增加1.394倍（OR=2.394,95%CI=1.490-3.848,p<0.001）。2.以性别进行分层分析,多因素Logistic回归结果提示:在男性组中,较高的腰围、甘油三酯、Epworth嗜睡量表（Epworth sleepiness scale,ESS）评分以及OSAHS是肝损伤的独立危险因素（p<0.05）。在女性组中,较高的BMI、空腹血糖是肝损伤的独立危险因素（p<0.05）,而OSAHS并非是肝损伤的独立危险因素（p>0.05）。以BMI进行分层分析,多因素Logistic回归结果提示:在肥胖组中,较高的空腹血糖以及OSAHS是肝损伤的独立危险因素（p<0.05）。在非肥胖组中,较高的BMI、甘油三酯以及OSAHS是肝损伤的独立危险因素（p<0.05）。以年龄进行分层分析,多因素Logistic回归结果提示:在老年组中,抗高血压以及OSAHS是肝损伤的独立危险因素（p<0.05）。在非老年组中,较高的BMI、空腹血糖、ESS评分以及OSAHS是肝损伤的独立危险因素（p<0.05）。3.与NC组相比,CIH组的血清ALT和AST均显着性升高。肝脏组织苏木精-伊红染色显示NC组肝小叶结构完整、清晰,肝细胞形态结构正常,汇管区无炎症细胞聚集。CIH组可观察到明显的肝组织病理学上的损伤,表现为肝细胞肿胀、坏死;炎症细胞尤其是淋巴细胞浸润。CIH组大鼠血清以及肝脏MDA水平显着高于NC组。CIH暴露显着降低了大鼠肝脏GPX4蛋白表达,同时增加了ACSL4蛋白表达。另外,CIH组大鼠肝脏Nrf2的蛋白表达水平显着性低于NC组。与NC组相比,CIH组大鼠肝脏HIF-1α蛋白表达水平显着升高。4.随着IH时间暴露时间增加,BRL-3A肝细胞活力逐渐降低。48h IH导致BRL-3A肝细胞活力显着性下降,脂质ROS水平、总Fe含量显着性升高,GPX4以及FTH1蛋白表达水平均显着性降低,Nrf2蛋白表达显着性增加。给予铁死亡抑制剂Ferrostatin-1处理显着性逆转IH导致细胞活力的下降,逆转IH导致的脂质ROS水平、总Fe含量的升高,逆转IH导致的GPX4以及FTH1蛋白表达水平的降低。沉默Nrf2明显加剧IH导致细胞活力的降低,加剧IH导致的脂质ROS水平、总Fe含量的升高,加剧IH导致的GPX4以及FTH1蛋白表达水平的降低。5.NAC干预显着性逆转CIH导致的小鼠血清ALT、AST增加以及缓解CIH导致的小鼠肝脏组织病理学损伤。与NC组相比,CIH组小鼠血清MDA以及肝脏MDA、Fe含量显着升高,血清以及肝脏GSH明显降低,而CIH+NAC组小鼠血清MDA以及肝脏MDA、Fe含量较CIH组降低,血清以及肝脏GSH则较CIH组显着增加。此外,NAC干预明显减轻了CIH导致的小鼠肝脏Nrf2、GPX4、FTH1蛋白表达水平的降低。结论:1.OSAHS是肝损伤的独立危险因素;校正混杂因素后,轻中度OSAHS肝损伤发生风险较对照组增加0.705倍,重度OSAHS肝损伤发生风险较对照组增加1.394倍。2.在男性人群中,OSAHS是肝损伤的独立危险因素;在女性人群中,OSAHS并非是肝损伤的独立危险因素。在肥胖人群、非肥胖人群、老年人群、非老年人群中,OSAHS均是肝损伤的独立危险因素。3.CIH动物模型显示CIH导致大鼠肝损伤、肝脏及全身氧化应激增加、肝脏出现铁死亡、肝Nrf2蛋白表达下降。4.IH细胞模型显示IH导致肝细胞铁死亡,铁死亡抑制剂能够逆转IH诱发的肝细胞铁死亡。IH导致大鼠肝细胞Nrf2表达升高,而沉默Nrf2则加剧IH诱发的肝细胞铁死亡。5.NAC可能通过提高GSH以及增加Nrf2表达缓解CIH导致的小鼠肝脏铁死亡以及肝损伤。
杨普煜[4]（2020）在《3-氯丙醇酯在大鼠体内的亚慢性毒性作用及其机制研究》文中进行了进一步梳理3-氯-1,2-丙二醇酯（3-monochloropropane 1,2-diol ester）,也称为3-氯丙醇酯,是游离3-氯丙醇与长链脂肪酸形成的酯类化合物。3-氯丙醇酯是食品热加工过程中产生的具有潜在毒性的物质,其安全性问题引起了食品科学界的广泛关注。然而,至今为止,3-氯丙醇酯的亚慢性毒性机制尚不明确,对于模式动物较长时间暴露于3-氯丙醇酯后所引起的内源性物质变化的研究也较为匮乏。因此,本论文选择两种具有代表性的3-氯丙醇单酯,包括3-氯丙醇-1-硬脂酸酯和3-氯丙醇-1-油酸酯作为研究对象,通过化学合成高纯度单体化合物,并采用液质联用和核磁共振波谱技术确证了其结构和纯度。采用Sprague-Dawley（SD）大鼠作为模式动物构建亚慢性毒性动物模型,模拟人体在日常饮食中可能摄入3-氯丙醇酯的剂量条件,进而评价其亚慢性毒性。病理切片研究结果表明,两种结构的3-氯丙醇酯在其高、低两个剂量下,分别拥有相似的毒性作用。毒性作用靶器官主要为肾脏和睾丸,对胸腺和肺也有一定程度的损伤,在肝脏和肠道组织中也引起了少量的炎症反应,且毒性作用均存在剂量依赖性。此外,3-氯丙醇酯受试组大鼠血清中的尿酸、尿素氮和肌酐等肾损伤相关指标、IFN-γ和TGF-β等炎症因子指标的水平显着上调,血清中睾酮指标的水平显着下调,且存在剂量依赖性。为了深入研究3-氯丙醇酯的亚慢性毒性作用机制,本论文运用蛋白质组学方法分析了3-氯丙醇酯对大鼠肾脏与睾丸组织中相关蛋白的差异表达情况,并采用GO分析和KEGG通路分析数据库对蛋白质组学结果进行分析。蛋白质组学结果表明,两种结构的3-氯丙醇酯呈现出相似的肾脏、睾丸亚慢性毒性作用。在大鼠肾脏中,3-氯丙醇酯主要影响了离子转运相关的蛋白,导致钙离子在体内的堆积,从而引发肾细胞凋亡,同时也激活了体内的二相酶和转运酶。此外,各种内源性生物代谢相关蛋白也发生了显着性变化,其中包括碳水化合物、氨基酸、氮、脂质、脂肪酸代谢和三羧酸循环相关蛋白。在大鼠睾丸中,3-氯丙醇酯主要引起了炎症反应,进而引发睾丸细胞坏死。为了进一步验证3-氯丙醇酯诱导肾细胞凋亡和睾丸细胞坏死的作用及机制,本论文分别采用大鼠肾小管导管上皮细胞系NRK-52E和小鼠睾丸间质细胞系TM3为细胞模型,通过si RNA干扰技术降低相关因子的表达后,研究发现3-氯丙醇酯可通过Caspase-9因子介导的内源性细胞凋亡途径引发肾细胞毒性,通过RIPK1和MLKL因子介导的细胞坏死途径引发睾丸细胞毒性的分子机制。此外,本论文还通过高分辨质谱结合代谢组学分析,初步探究了3-氯丙醇酯的中长期暴露对大鼠内源性物质代谢的影响,筛选出了3-氯丙醇酯在大鼠血浆、尿液和粪便中的11个生物学标志物,包括高半胱氨酸、4-庚酮、乙酰苯丙氨酸、γ-谷氨酰胺异亮氨酸、3-酮基-2-甲基丁酸、甲基丙二酰基肉碱、溶血磷脂胆碱、反式肉碱、15d-前列腺素J2、13,14-二氢前列腺素F-1α和四氢脱氧皮质醇,这些生物学标志物为3-氯丙醇酯中长期暴露诊断和安全评价提供了科学依据。
季鹏[5]（2020）在《百草枯中毒模型建立及辅酶Q10解毒药效作用研究》文中研究指明百草枯在我国被广泛应用于农业生产,是一种高毒性季铵盐类除草剂,对人畜均有极强的毒性。百草枯中毒无特效解毒药,仍以支持治疗为主,预后较差,因此中毒后病死率极高,已成为社会亟待解决的严重公共卫生问题。本研究基于秀丽隐杆线虫与小鼠两种模式生物,构建百草枯中毒动物模型,初步探究辅酶Q10（CoQ10）作为抗氧化剂应用于百草枯中毒救治的可行性。1.构建百草枯中毒秀丽隐杆线虫模型（1）百草枯梯度浓度作用秀丽隐杆线虫,通过对线虫生存情况、吞咽能力、运动能力进行统计分析,筛选出构建百草枯中毒秀丽隐杆线虫模型百草枯浓度为5mg/m L,在百草枯5 mg/m L浓度作用下显着缩短线虫寿命。（2）CoQ10梯度浓度作用百草枯中毒秀丽隐杆线虫模型,结果发现CoQ10呈剂量依赖性延长百草枯中毒线虫寿命,对百草枯中毒线虫表现出良好的救治效果。（3）CoQ10对百草枯中毒秀丽隐杆线虫可能的作用机制:采用DCFH-DA荧光探针检测线虫体内ROS含量,CoQ10预处理能够降低百草枯中毒线虫体内ROS含量,抑制ROS上升水平;通过实时荧光定量（qPCR）检测线虫体内8种氧化应激基因谷氨酰半胱氨酸合成酶（gcs-1）、谷胱甘肽S-转移酶（gst-4、gst-20）、超氧化物岐化酶（sod-1、sod-2、sod-3、sod-4、sod-5）的m RNA表达水平,CoQ10预处理可抑制百草枯诱导的线虫体内谷胱甘肽S-转移酶基因家族、超氧化物岐化酶基因家族部分基因mRNA表达上升水平,抑制百草枯中毒线虫体内氧化应激;通过对转基因线虫CL2166（GST-4::GFP）荧光成像,CoQ10预处理可以降低百草枯中毒线虫体内氧化应激水平;通过TBA比色法检测线虫体内MDA含量,CoQ10预处理可以降低百草枯中毒线虫体内脂质过氧化水平,减轻线虫体内氧化损伤程度。2.构建百草枯中毒小鼠模型（1）百草枯不同剂量对小鼠灌胃,根据小鼠的生存情况,筛选出构建百草枯中毒小鼠模型百草枯灌胃剂量为80 mg/kg。（2）通过CoQ10灌胃给药中毒小鼠,检测小鼠死亡率来研究CoQ10对百草枯中毒小鼠的救治效果。CoQ10给药能明显改善百草枯中毒小鼠呼吸急促,行动迟缓,精神萎靡等症状,同时提高中毒小鼠生存几率。CoQ10对百草枯中毒小鼠表现出良好的救治效果。（3）CoQ10灌胃给药百草枯中毒小鼠。通过计算小鼠肺组织湿干重比值,CoQ10给药可以降低百草枯中毒小鼠肺组织湿干重比值,在一定程度上减轻中毒小鼠肺部水肿病症;通过DCFH-DA荧光探针检测小鼠肺组织内ROS含量,CoQ10给药可以一定程度减少百草枯中毒小鼠小鼠肺组织内ROS含量;通过WST-1比色法检测小鼠肺组织内SOD活性,CoQ10给药可以一定程度提高百草枯中毒小鼠肺组织内SOD活性;通过TBA比色法检测小鼠肺组织内MDA含量,CoQ10给药可以一定程度减少百草枯中毒小鼠肺组织内MDA含量。（4）为了进一步检测CoQ10对百草枯中毒小鼠肺部损伤的影响,对中毒小鼠肺组织做石蜡切片,并进行病理分析。CoQ10给药可以明显改善百草枯中毒小鼠肺组织结构紊乱,减轻肺泡内出血,减少炎症细胞浸润,减轻百草枯中毒小鼠肺部损伤。综上结果表明,CoQ10发挥重要抗氧化作用,可以有效清除体内过量产生的ROS,减轻氧化应激,具有较好的抗脂质过氧化作用,可以减轻百草枯诱导脂质过氧化损伤,减轻百草枯中毒对机体损伤程度,对两种模式生物百草枯中毒后均表现出良好的救治效果,对百草枯中毒主要损伤器官肺脏具有一定保护作用。
曾宝真[6]（2020）在《MGST1在肺腺癌中的表达意义及对肺腺癌细胞的作用机制研究》文中认为[目的]分析MGST1在肺腺癌中的表达水平及其临床意义;研究敲减MGST1对肺腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移和裸鼠体内生长能力等生物学功能的影响;探讨MGST1在肺腺癌中发挥生物学功能的初步作用机制。[方法]1、通过GEO数据库和TCGA数据库分析MGST1在肺癌组织和正常肺组织中的表达差异;采用IHC技术检测MGST1在肺腺癌组织中的表达水平;采用卡方检验分析MGST1的表达水平与肺腺癌患者临床病理参数的关系;采用Kaplan-Meierplotter预测网站和生存曲线分析MGST1表达对肺腺癌患者预后的影响。2、qRT-PCR和Western blot检测MGST1在肺腺癌细胞系中的表达水平;构建MGST1敲减慢病毒（MGST1 shRNA）,感染MGST1高表达的两株肺腺癌细胞系,qRT-PCR和Western blot检测MGST1 shRNA敲减效率;MTS、EdU和平板克隆实验检测MGST1 shRNA对细胞增殖能力的影响;流式细胞仪检测MGST1 shRNA对细胞凋亡的影响;Western blot检测MGST1 shRNA对细胞凋亡相关蛋白caspase家族和Bcl-2表达的影响;Boyden小室实验检测MGST1 shRNA对细胞侵袭能力的影响;Transwell小室检测MGST1 shRNA对细胞迁移能力的影响;裸鼠皮下成瘤实验检测MGST1 shRNA对肺腺癌细胞体内生长能力的影响。3、采用全转录组测序技术检测MGST1敲减前后A549细胞中的差异表达基因,并采用生物学信息网站分析差异表达基因与肿瘤生物学功能和经典信号通路的关系;Western blot 检测 MGST1 shRNA 对 AKT/GSK3β/β-catenin信号通路的影响;采用AKT激动剂SC79进行功能回复实验,功能实验检测MGST1通过调控AKT/GSK3β/β-catenin信号通路影响肺腺癌细胞的增殖和迁移能力。[结果]1、GEO数据库分析显示MGST1在肺癌组织中的表达高于其在正常肺组织中的表达（p<0.05）;TCGA数据库分析显示MGST1在肺腺癌组织中的表达高于其在正常肺组织中的表达（p<0.05）;IHC技术检测MGST1在173例肺腺癌组织中的阳性表达率（76.30%）高于在其配对的远端非癌组织中的阳性表达率（41.62%）（p<0.05）;肺腺癌组织中MGST1阳性表达与患者AJCC分期呈正相关（p<0.05）;MGST1阳性表达的患者预后较差,是肺腺癌患者预后不良的独立危险因素。2、与正常支气管上皮细胞系BEAS-2B相比,MGST1在肺腺癌细胞系NCI-H2342、NCI-H1975、A549 和 PC-9 中的表达均升高,在 A549 和 PC-9细胞中表达较高（p<0.05）;构建的MGST1 shRNA显着降低肺腺癌细胞A549 和 PC-9 细胞中 MGST1 mRNA 和蛋白的表达（p<0.05）;MTS、EdU和平板克隆实验结果显示,与scramble组相比,shMGST1-1和shMGST1-2组A549和PC-9细胞增殖能力降低（p<0.05）;流式细胞仪检测结果显示,与scramble组相比,shMGST1-1和shMGST1-2组A549细胞的早期凋亡率增加（p<0.05）;凋亡相关蛋白检测结果显示,与scramble组相比,shMGST1-1 和 shMGST1-2 组 A549 细胞中促凋亡蛋白cleaved-caspase9、cleaved-caspase3和cleaved-PARP表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低（p<0.05）;Boyden小室实验检测结果显示,与scramble组相比,shMGST1-1 和 shMGST1-2 组 A549 和 PC-9 细胞侵袭能力降低（p<0.05）;Transwell小室实验检测结果显示,与scramble组相比,shMGST1-1和shMGST1-2组A549和PC-9细胞迁移能力降低（p<0.05）;裸鼠皮下成瘤实验结果显示,与scramble组相比,shMGST1-1组A549细胞在裸鼠体内生长速度、成瘤体积和瘤体重量均降低（p<0.05）。3、全转录组测序技术及生物信息学分析结果显示,MGST1调控A549细胞中10042个差异表达基因,其中4899个基因在MGST1敲减后表达上调,5143个基因表达下调。功能分析（GO Analysis）显示差异表达基因与细胞生长、凋亡和侵袭相关;细胞信号通路分析（Pathway Analysis）显示差异表达基因富集在AKT信号通路;Western blot结果证实,敲减MGST1可抑制AKT/G3K-3β/β-catenin 信号通路中关键蛋白 pAKT、pG3K-3β和β-catenin的表达（p<0.05）;功能实验检测发现AKT激动剂SC79可减弱MGST1 shRNA对肺腺癌细胞增殖和迁移能力的抑制作用（p<0.05）。[结论]1、MGST1在肺腺癌组织和细胞系中高表达。2、MGST1高表达与患者AJCC分期呈正相关,是肺腺癌患者预后不良的分子标志物。3、敲减MGST1的表达抑制肺腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力和裸鼠体内生长能力,促进细胞凋亡,MGST1可能是治疗肺腺癌的候选靶标。4、MGST1可能通过调控AKT/GSK3β/β-catenin信号通路促进肺腺癌的恶性进展。
黄小溪[7]（2020）在《香烟烟雾所致大鼠肝脏毒性作用及其机制研究》文中研究指明目的:构建不同暴露时间和不同暴露剂量的大鼠被动吸烟模型,评估香烟烟雾对大鼠的肝毒性作用,进一步探讨其发生机制。方法:SD大鼠120只,根据前期预实验结果随机分为4、8、12周的3个染毒时间组,每组40只动物,每个时间组再分为空白对照组和低、中、高染毒剂量组（即0、10、20、30支香烟/天组）,每组10只动物,各染毒剂量组每日染毒1次,每次30分钟,连续不间断染毒周期分别为4、8、12周。染毒结束后观察各组大鼠的体重、肝脏重量、计算肝脏脏器系数以及观察肝组织病理结构的改变;对各组大鼠肝脏组织和血清中的转氨酶及血脂代谢相关指标的变化进行测定;对大鼠肝脏组织中氧化应激指标MDA含量、GSH-Px活性及SOD活性的变化水平进行检测;用RT-PCR方法检测线粒体介导的肝细胞凋亡通路中Bax、Bcl-2及Cleaved-Caspase3基因的mRNA的表达水平;再以Western-Blot及免疫组化方法检测线粒体介导的肝细胞凋亡通路中Bax、Bcl-2及CleavedCaspase3蛋白的表达水平变化。结果:（1）香烟烟雾使暴露组大鼠出现精神欠佳、自主活动减少、烦躁不安等现象,个别大鼠出现步调不稳情况;较空白对照组,暴露组大鼠体重增长相对缓慢,且各周期的高剂量组大鼠体重均低于对照组,差别有统计学意义（均P<0.05）;各周期暴露组大鼠肝脏重量较空白对照组均减轻,其中以暴露8周组大鼠变化较明显,差别有统计学意义（P<0.05）;（2）病理可见染毒组大鼠肝组织在暴露初期出现点灶状坏死,肝血窦及静脉淤血,汇管区扩张,随着暴露时间延长,肝组织中肝细胞肿胀,胞浆疏松化,进一步肝细胞肿胀如球出现气球样变,且部分肝细胞肿胀破裂;（3）暴露组肝组织AST及ALT转氨酶表达水平呈现上升趋势,其中AST表达水平较空白对照组在8周、12周升高明显,差异均有统计学意义（均P<0.001）,各周期的高剂量组ALT表达水平较空白对照组升高显着,差异有统计学意义（均P<0.05）;各暴露组大鼠血清TBIL轻度上升,但与对照组相比差别无统计学意义（均P>0.05）;暴露组大鼠血清的TG与TC较空白对照组相比有上升趋势,血清TC中以8周低剂量组及12周中剂量组上升显着,其他各组血清的TC量无显着变化（P>0.05）;血清TG除12周低剂量组,其他暴露组血清TG升高较空白对照组差别有统计学的意义（均P<0.05）;（4）各暴露组大鼠肝组织中MDA含量有明显升高趋势（均P<0.05）,而SOD及GSH-Px活性水平较空白对照组均表现下降趋势,且以8周和12周组下降显着（P<0.05）;（5）Bax基因在mRNA水平有上调趋势,且在各周期的高剂量组上调显着,差异有统计学意义（均P<0.001）;Bcl-2基因在mRNA水平有下调趋势,各暴露组与空白对照组相比下调均显着,差别有统计学意义（均P<0.05）;Cleaved-Caspase3基因在mRNA水平有上调趋势,各暴露组与空白对照组相比表达均明显上调,差别有统计学意义（均P<0.05）;（6）经Western-Blot及免疫组化方法的半定量分析可见,暴露组Bax蛋白及Cleaved-Caspase3蛋白的表达量均上调,其中以各周期高剂量组上调显着,差别有统计学意义（均P<0.05）;暴露组Bcl-2蛋白表达量呈下调趋势,其中以4周组的蛋白表达下调明显（P<0.05）。结论:（1）香烟烟雾暴露会抑制大鼠生长发育,并使肝脏组织发生炎症反应,肝组织中的生物酶活性及肝脏血脂代谢随着暴露周期及剂量的改变而发生变化,提示香烟烟雾暴露会产生一定程度的肝毒性;（2）大量的香烟烟雾的积累,使大鼠机体产生氧化应激反应,最终氧化与抗氧化系统严重失衡,从而细胞凋亡程序产生,Bax及Cleaved-Caspase3在mRNA水平和蛋白水平表达量均上调,Bcl-2在mRNA及蛋白水平表达量出现下调,说明香烟烟雾暴露确实引起了线粒体介导的肝细胞凋亡现象。由此可推论大鼠肝脏可能是香烟烟雾毒作用的靶器官之一,香烟烟雾暴露对大鼠具有的肝毒性,线粒体介导的肝细胞凋亡可能是大鼠肝细胞凋亡的机制之一。
张丽[8]（2020）在《环境内分泌干扰物-硫酸镍暴露对大鼠肝脏和肾脏组织氧化应激指标的影响》文中研究指明目的:检测亚慢性硫酸镍（Nickel Sulfate,NiSO4）染毒状态下,大鼠肝和肾组织内丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力、核转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）和血红素氧合酶1（HO-1）mRNA表达水平以及血清天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）水平的变化,探讨NiSO4暴露对雄性Wistar大鼠脂质过氧化作用及抗氧化防御系统的影响。方法:1.选择20只健康性成熟的SPF级雄性Wistar大鼠（180-220g）,按体重分层随机分为正常对照组（0.9%生理盐水等容积腹腔注射（ip）,5ml/kg/d）、NiSO4染毒低剂量组（2.5mg/kg/d.ip）、中剂量组（5mg/kg/d.ip）和高剂量组（10mg/kg/d.ip）,连续染毒40天,自由摄食及饮水,整个实验期间观察大鼠的精神状态及一般活动情况,记录体重。2.染毒结束后次日称重,麻醉后腹主动脉采血,收集大鼠血清,离心后用生化分析仪检测肝和肾功能指标,包括:AST、ALT、Cr和BUN。颈椎脱位法处死大鼠,打开腹腔,取出部分肝和肾组织制备相应样本,分别用化学比色法和羟胺法检测各组大鼠肝和肾组织匀浆中MDA含量和SOD活力;采用Real-timePCR（RT-PCR）法检测各组大鼠肝和肾组织中抗氧化指标Nrf2、HO-1mRNA的表达水平。结果:1.NiSO4可使大鼠体重增重放缓:在染毒至第40天时,高剂量组大鼠的体重增重较低、中剂量组放缓（P<0.05）;整个染毒期结束,高剂量组的体重增长速率较低剂量组下降（P<0.05）。2.镍暴露可使大鼠血清ALT和AST水平、肝组织MDA水平呈上升趋势,但无统计学意义（P>0.05）;肝组织SOD活力呈先上升后下降趋势:与对照组相比,低剂量组SOD活力有上升趋势（P>0.05）,中、高剂量组SOD活性下降（P<0.05）。3.通过RT-PCR法检测肝组织Nrf2和HO-1mRNA水平变化:（1）与对照组相比,低、中剂量组Nrf2mRNA表达水平显着上升（P<0.01）,高剂量组Nrf2mRNA表达水平有下降趋势（P>0.05）;各染毒组之间,高剂量组Nrf2mRNA表达水平明显比低、中剂量组低（P<0.01）;（2）与对照组相比,低剂量组HO-1mRNA表达水平有上升趋势（P>0.05）,高剂量组HO-1mRNA表达水平显着下降（P<0.01）;各染毒组之间,高剂量组HO-1mRNA表达水平比低剂量组低（P<0.05）。4.大鼠血清BUN、Cr水平:与对照组相比,中、高剂量组BUN、Cr水平显着升高（P<0.01）,各染毒组之间,中、高剂量组BUN、Cr水平显着高于低剂量组（P<0.01）;镍暴露可升高大鼠肾组织MDA水平（P>0.05）;肾组织SOD活力呈先上升后下降趋势:与对照组相比,低剂量组SOD活性有上升趋势,中、高剂量组SOD活性有下降趋势（P>0.05）;中、高剂量组SOD活性较低剂量组下降,差异有统计学意义（P<0.05）。5.通过RT-PCR法检测肾组织Nrf2和HO-1mRNA水平变化:（1）与对照组相比,低、中剂量组Nrf2mRNA表达水平上升（P<0.05）,高剂量组Nrf2mRNA表达水平显着下降（P<0.01）;各染毒组之间,高剂量组Nrf2mRNA表达水平比低、中剂量组低（P<0.05）;（2）与对照组相比,低、中剂量组HO-1mRNA表达水平呈上升趋势（P>0.05）,高剂量组HO-1mRNA表达水平显着下降（P<0.01）;各染毒组之间,高剂量组HO-1mRNA表达水平比低、中剂量组低（P<0.05）。结论:（1）大鼠肾功能相关的代谢物水平明显异常,肝功能相关的酶活力呈升高趋势,说明NiSO4以腹腔注射法染毒可造成大鼠肾组织损伤,对肝脏功能有一定影响,但还在可代偿范围。（2）亚慢性NiSO4染毒对大鼠肝脏、肾脏影响的机制与氧化应激、激活Nrf2抗氧化信号通路密切相关,且酶活性的变化与抗氧化基因的表达是同步的。
王剑铭[9]（2019）在《微粒体环氧化物水解酶在香烟诱导的慢性阻塞性肺疾病小鼠肺损伤过程的作用探索》文中研究表明目的:1、观察香烟烟雾诱导的COPD小鼠肺组织中mEH及Nrf2基因的表达水平变化;2、探索Nrf2基因水平改变对CSE诱导的BEAS-2B细胞mEH基因表达的影响;3、探索mEH基因水平改变对CSE诱导的BEAS-2B细胞炎症水平的影响。方法:1.香烟烟雾诱导的COPD模型小鼠mEH和Nrf2基因表达水平变化3-5周龄C57BL/6小鼠随机分为空白对照组,COPD模型组。空白对照组相同室温环境下不做任何处理。对于COPD模型组,采用自制烟熏箱,对C57BL/6小鼠进行24周的烟熏干预。观察小鼠一般情况,造模完成后,处死小鼠,收集小鼠肺功能结果,获取小鼠支气管肺泡灌洗液、肺组织HE染色;留取小鼠肺组织、及血浆,应用qPCR及WB方法分别检测小鼠肺组织mEH及Nrf2的mRNA和蛋白的表达水平,采用ELISA方法检测支气管肺泡灌洗液和血浆中mEH浓度。2.转录因子Nrf2对CSE诱导BEAS-2B细胞mEH的表达影响BEAS-2B细胞于含10%FBS的DMEM培养基中,置于37℃,5%CO2的培养箱中培养。制备CSE,以酶标仪测定其OD340,检测其稳定性及一致性。通过CCK-8法检测CSE对BEAS-2B细胞的毒性,明确CSE的最佳干预浓度及时长。将细胞分为（1）Control组、（2）CSE干预组。以5%CSE溶液干预BEAS-2B细胞12H,采用qPCR及WB方法分别mEH和Nrf2基因表达水平变化。将细胞分为（1）Control组、（2）Nrf2 siRNA组、（3）CSE干预组、（4）Nrf2 siRNA+CSE组。Nrf2 siRNA干扰Nrf2基因表达,弃转染液后以5%CSE继续干预BEAS-2B细胞12H,应用qPCR及WB方法分别检测BEAS-2B细胞mEH及Nrf2的mRNA和蛋白的表达水平。3.mEH对CSE介导的BEAS-2B细胞炎症反应的作用将细胞分为（1）Control组、（2）mEH siRNA组、（3）CSE干预组、（4）mEH siRNA+CSE组。mEH siRNA干扰mEH基因表达,弃转染液后以5%CSE继续干预BEAS-2B细胞12H,应用qPCR检测BEAS-2B细胞mEH mRNA表达水平,采用ELISA法评估细胞上清液中IL-6、IL-8的水平。结果:1.香烟烟雾诱导的COPD小鼠mEH和Nrf2基因表达水平变化经香烟烟雾干预24周可成功建立小鼠慢性阻塞性肺疾病模型。COPD模型组其mEH及Nrf2 mRNA和蛋白表达量均显着高于空白对照组,P<0.05。COPD模型组血浆中mEH浓度水平显着高于空白对照组,P<0.05。对于支气管肺泡灌洗液中mEH浓度水平,COPD模型组与空白对照组差异无统计学差异,P>0.05。2.转录因子Nrf2调控CSE诱导BEAS-2B细胞mEH的表达2.1连续6次不同时间制备的CSE OD340无统计学差异,P>0.05,提示该方法制备的CSE一致性良好,稳定。通过CCK-8法提示CSE随着浓度增高、干预时间延长,对BEAS-2B细胞的抑制率增大,5%CSE在12H及以后明显的抑制率,且在干预12H是Nrf2 mRNA表达量最为显着。2.2以5%CSE干预BEAS-2B细胞12H,CSE干预组mEH及Nrf2 mRNA和蛋白表达量明显高于Control组,P<0.05。2.3沉默Nrf2基因,继续5%CSE干预BEAS-2B细胞12H,Nrf2 siRNA+CSE组mEH及Nrf2 mRNA和蛋白表达量较CSE干预组显着下调,P<0.05。3.mEH对CSE介导的BEAS-2B细胞炎症反应的作用沉默mEH基因,继续5%CSE干预BEAS-2B细胞12H,mEH siRNA+CSE组mEH mRNA表达量较于CSE干预组显着下调（P<0.05）,较于mEH siRNA组明显的升高（P<0.05）。相较Control组,CSE干预组IL-6、IL-8水平明显升高,P<0.05。相较mEH siRNA组和CSE干预组,mEH siRNA+CSE组IL-6、IL-8水平显着升高,P<0.05。结论:1.香烟烟雾诱导的COPD小鼠肺组织中mEH和Nrf2基因表达增加,能引起血浆中mEH浓度上升;2.转录因子Nrf2可调控CSE诱导BEAS-2B细胞mEH的基因表达;3.沉默mEH基因导致CSE诱导的炎症反应水平显着升高。
刘雨[10]（2019）在《金水六君煎治疗慢性阻塞性肺疾病阴虚痰饮作用机制研究》文中研究指明目的:通过观察金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病（COPD）阴虚痰饮证大鼠与A549黏液高分泌细胞模型的影响,探讨金水六君煎治疗COPD气道黏液高分泌作用机理。方法:实验一:采用气道内滴入脂多糖+烟熏+糖皮质激素方法复制COPD大鼠阴虚痰饮证模型。观察大鼠病理形态学、肺功能评估COPD模型;大鼠一般状态、血清cAMP、cGMP、ACTH、CORT及红细胞Na+-K+-ATP酶活性评价阴虚状态;气道杯状细胞及黏蛋白MUC5AC评估痰饮情况。实验二:采用气道内滴入脂多糖+烟熏+糖皮质激素方法制备COPD大鼠阴虚痰饮证模型,阿奇霉素及金水六君煎低、中、高剂量进行干预,PAS染色检测杯状细胞数及黏蛋白表达量,RT-PCR及Western法检测肺组织MUC5AC、AQP5基因与蛋白表达。实验三:采用人中性粒细胞弹性蛋白酶诱导体外A549细胞黏液高分泌,金水六君煎及其拆方含药血清进行干预,CCK8法检测细胞活性,RT-PCR及Western法检测A549细胞MUC5AC、AQP5基因与蛋白表达,Elisa法检测细胞培养液MUC5AC、AQP5蛋白表达。结果:实验一:模型组大鼠肺组织表现出慢性炎症、肺气肿、纤维化等COPD病理改变;肺阻力及肺顺应性较空白组差异无明显统计学意义;血清CORT、cAMP、cGMP含量明显减少（P<0.05）,红细胞Na+-K+-ATP酶活性降低（P<0.05）;气道杯状细胞数明显增加（P<0.05）,MUC5AC表达显着减少（P<0.01）。与模型组比较,养阴组CORT、cAMP、cGMP含量及红细胞Na+-K+-ATP酶活性明显增加（P<0.05）,气道杯状细胞数及MUC5AC表达明显增多（P<0.05）;金水六君煎组CORT含量明显降低（P<0.01）,红细胞Na+-K+-ATP酶活性增加（P<0.05）,气道杯状细胞数及MUC5AC表达明显增多（P<0.05）;化痰组ACTH、CORT、cAMP、cGMP、红细胞Na+-K+-ATP酶活性、气道杯状细胞数及MUC5AC表达差异无明显统计学意义。实验二:与正常组比较,模型组气道杯状细胞数明显增多（P<0.01）,肺组织MUC5ACmRNA表达明显上调（P<0.05）,AQP5mRNA及蛋白表达显着下调（P<0.01）。与模型组比较,金水六君煎中剂、高量组能显着下调MUC5ACmRNA表达（P<0.05）,金水六君煎中剂量组AQP5mRNA表达明显上调（P<0.01）。余各组AQP5基因及蛋白较正常组均明显降低（P<0.05）。实验三:模型组细胞MUC5ACmRNA与蛋白表达明显增多（P<0.05）,AQP5mRNA与蛋白表达明显降低（P<0.05）。与模型组比较,金水六君煎组及养阴组MUC5ACmRNA表达明显降低（P<0.05）,AQP5mRNA表达明显增多（P<0.05）,金水六君煎组及化痰组MUC5AC蛋白表达明显减少（P<0.05,P<0.01）,化痰组AQP5蛋白表达明显升高（P<0.05）。金水六君煎组及养阴组培养液AQP5蛋白表达明显增加（P<0.05）。结论:1.烟熏联合气道脂多糖滴入及地塞米松肌注构建的模型为COPD痰饮合并肾阴阳两虚病证结合模型。2.纠正黏蛋白/水盐比例失衡可能是金水六君煎治疗COPD气道黏液高分泌的机制之一。3.金水六君煎养阴作用与拮抗糖皮质激素对肾上腺皮质抑制,纠正环核苷酸代谢失调有关。
二、吸烟对大鼠血清及肺组织谷胱甘肽S-转移酶活性的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、吸烟对大鼠血清及肺组织谷胱甘肽S-转移酶活性的影响（论文提纲范文）
（1）大气PM2.5及其它污染因子致肺损伤分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 综述 |
| 1.1 PM_(2.5)污染现状及危害 |
| 1.1.1 PM_(2.5)污染现状 |
| 1.1.2 PM_(2.5)污染的危害 |
| 1.2 NPAHS污染现状及危害 |
| 1.2.1 NPAHs污染现状 |
| 1.2.2 NPAHs污染的危害 |
| 1.3 SO_2污染现状及危害 |
| 1.3.1 SO_2污染现状 |
| 1.3.2 SO_2污染的危害 |
| 1.4 内毒素污染现状及危害 |
| 1.4.1 内毒素污染现状 |
| 1.4.2 内毒素污染的危害 |
| 1.5 污染物联合暴露毒性研究 |
| 1.6 肺部疾病主要机制 |
| 1.6.1 炎症机制 |
| 1.6.2 氧化应激 |
| 1.6.3 DNA损伤 |
| 1.6.4 表观遗传学机制 |
| 1.6.5 铁死亡与肺部疾病 |
| 1.7 本课题的提出及研究内容和意义 |
| 1.7.1 研究内容及意义 |
| 1.7.2 创新点 |
| 第二章 气道滴注PM_(2.5)、1-NP和9-NA致大鼠肺DNA损伤的分子机制研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 材料、试剂与仪器 |
| 2.2.2 PM_(2.5)样品采集 |
| 2.2.3 PM_(2.5)成分分析 |
| 2.2.4 PM_(2.5)混悬液、1-NP和9-NA溶液制备 |
| 2.2.5 动物处理方法 |
| 2.2.6 彗星实验分析 |
| 2.2.7 检测DNA与蛋白质交联率 |
| 2.2.8 实时定量PCR(RT-PCR)分析 |
| 2.2.9 蛋白免疫印迹(WB)分析 |
| 2.2.10 酶联免疫吸附分析(ELISA) |
| 2.2.11 数据统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 PM_(2.5)、1-NP和9-NA暴露引起大鼠肺DNA损伤 |
| 2.3.2 PM_(2.5)、1-NP和9-NA暴露对大鼠肺组织DNA损伤修复基因表达的影响 |
| 2.3.3 PM_(2.5)、1-NP和9-NA暴露引起大鼠肺氧化应激 |
| 2.3.4 PM_(2.5)、1-NP和9-NA暴露对大鼠肺组织代谢酶活性的影响 |
| 2.3.5 比较PM_(2.5)与中浓度 1-NP、PM_(2.5)与中浓度 9-NA对大鼠肺DNA损伤效应 |
| 2.4 讨论与小结 |
| 第三章 真实环境大气PM_(2.5)暴露致大鼠肺DNA损伤的分子机制研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 材料、试剂与仪器 |
| 3.2.2 真实环境大气PM_(2.5)暴露系统 |
| 3.2.3 PM_(2.5)样品采集 |
| 3.2.4 PM_(2.5)成分分析 |
| 3.2.5 动物处理方法 |
| 3.2.6 HE分析 |
| 3.2.7 RT-PCR分析 |
| 3.2.8 WB分析 |
| 3.2.9 ELISA分析 |
| 3.2.10 亚硫酸氢盐测序(BSP)分析 |
| 3.2.11 数据统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 真实环境大气PM_(2.5)暴露对大鼠体重和肺体比的影响 |
| 3.3.2 真实环境大气PM_(2.5)暴露引起大鼠肺组织病理损伤 |
| 3.3.3 真实环境大气PM_(2.5)暴露引起大鼠肺DNA损伤 |
| 3.3.4 真实环境大气PM_(2.5)暴露引起大鼠肺氧化应激 |
| 3.3.5 真实环境大气PM_(2.5)暴露引起大鼠肺组织OGG1和MTH1 启动子区DNA甲基化水平变化 |
| 3.3.6 真实环境大气PM_(2.5)暴露对肺组织DNA损伤修复基因表达的影响 |
| 3.3.7 真实环境大气PM_(2.5)暴露对肺组织癌基因和抑癌基因表达的影响 |
| 3.4 讨论与小结 |
| 第四章 PM_(2.5)和SO_2复合暴露致大鼠肺炎症损伤的分子机制研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 材料、试剂与仪器 |
| 4.2.2 PM_(2.5)样品采集 |
| 4.2.3 PM_(2.5)成分分析 |
| 4.2.4 动物处理方法 |
| 4.2.5 炎性细胞计数 |
| 4.2.6 HE分析 |
| 4.2.7 透射电子显微镜观察 |
| 4.2.8 RT-PCR分析 |
| 4.2.9 WB分析 |
| 4.2.10 ELISA分析 |
| 4.2.11 数据统计分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 PM_(2.5)和SO_2复合暴露引起大鼠肺组织病理损伤 |
| 4.3.2 PM_(2.5)和SO_2复合暴露引起大鼠肺组织超微结构改变 |
| 4.3.3 PM_(2.5)和SO_2复合暴露对大鼠肺泡灌洗液中炎性细胞数目的影响 |
| 4.3.4 PM_(2.5)和SO_2复合暴露影响大鼠肺组织炎性指标水平变化 |
| 4.3.5 PM_(2.5)和SO_2复合暴露对大鼠肺组织NO/i NOS的影响 |
| 4.3.6 PM_(2.5)和SO_2复合暴露对大鼠肺组织TLR4/p38/NF-κB通路相关因子表达的影响 |
| 4.4 讨论与小结 |
| 第五章 PM_(2.5)和LPS复合暴露对小鼠肺组织铁死亡和纤维化相关因子表达的影响 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 材料、试剂与仪器 |
| 5.2.2 PM_(2.5)样品采集 |
| 5.2.3 PM_(2.5)成分分析 |
| 5.2.4 动物分组及染毒 |
| 5.2.5 HE分析 |
| 5.2.6 WB分析 |
| 5.2.7 ELISA分析 |
| 5.2.8 Masson染色分析 |
| 5.2.9 数据统计分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 真实环境大气PM_(2.5)和LPS复合暴露引起小鼠体重和肺脏器系数变化 |
| 5.3.2 真实环境大气PM_(2.5)和LPS复合暴露引起小鼠肺组织病理损伤 |
| 5.3.3 真实环境大气PM_(2.5)和LPS复合暴露对小鼠肺组织氧化应激指标的影响 |
| 5.3.4 真实环境大气PM_(2.5)和LPS复合暴露对小鼠肺组织铁死亡指标的影响 |
| 5.3.5 真实环境大气PM_(2.5)和LPS复合暴露对小鼠组织肺纤维化的影响 |
| 5.4 讨论与小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简况及联系方式 |
（2）基于氧化应激及炎症反应探讨尺泽穴位注射NS对COPD大鼠的作用机制（论文提纲范文）
| 中英文缩略表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 造模及分组方法 |
| 2.2 干预方式 |
| 2.3 称重及一般情况观察 |
| 2.4 取材 |
| 3 标本检测及方法 |
| 3.1 肺脏外观拍摄及病理切片染色 |
| 3.2 肺组织、血清的SOD活力、MDA含量的检测 |
| 3.3 肺组织、血清的IL-6、IL-8、TNF-α含量的检测 |
| 3.4 Nrf2/ARE通路相关蛋白的m RNA检测 |
| 3.5 肺组织Nrf2、HO-1、GSTm蛋白的检测 |
| 4 统计学方法 |
| 5 技术路线图 |
| 研究结果 |
| 1 大鼠一般情况 |
| 1.1 大鼠一般情况 |
| 1.2 干预后大鼠一般情况 |
| 2 各组大鼠肺脏外观及肺组织形态学变化 |
| 2.1 干预前模型大鼠肺脏外观及肺组织形态学变化 |
| 2.2 干预后各组大鼠肺脏外观及肺组织形态学变化 |
| 3 各组大鼠肺通气功能改变 |
| 4 各组大鼠血清及肺匀浆中的SOD活力和MDA含量的变化 |
| 5 各组大鼠血清、肺匀浆中的炎症因子水平的变化 |
| 6 各组大鼠肺组织中的Nrf2、Ho1、GSTm的mRNA及蛋白的表达情况 |
| 讨论与分析 |
| 1 COPD的中西医发病机制及疾病特点 |
| 1.1 COPD的中医认识及病因病机 |
| 1.2 COPD的西医认识及发病机制 |
| 2 尺泽的选穴依据 |
| 3 穴位注射疗法治疗COPD的依据 |
| 4 氧化应激相关指标的选择依据 |
| 5 炎症相关细胞因子指标选取依据 |
| 6 Nrf2/ARE通路与Nrf2、HO-1、GSTm蛋白的关系 |
| 7 研究结果及分析 |
| 7.1 造模方法讨论 |
| 7.2 干预时间的选择 |
| 7.3 大鼠毛色及体重的变化 |
| 7.4 肺部组织形态学变化的分析 |
| 7.5 肺通气功能指标的分析 |
| 7.6 抗氧化水平指标的分析 |
| 7.7 炎症因子指标的分析 |
| 7.8 Nrf2/ARE通路的分析 |
| 8 展望与存在的问题 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 针灸治疗COPD大鼠的实验室研究最新进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（3）阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征与肝损伤的相关性及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 第一章 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征与肝损伤相关性的大样本临床研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 铁死亡在慢性间歇低氧诱导大鼠肝损伤中的作用 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 间歇低氧诱导BRL-3A肝细胞铁死亡及相关机制的研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 N-乙酰半胱氨酸对慢性间歇低氧小鼠肝脏铁死亡以及肝损伤的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 全文总结 |
| 研究的不足及展望 |
| 参考文献 |
| 综述 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征与肝损伤相关性研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（4）3-氯丙醇酯在大鼠体内的亚慢性毒性作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 3-氯丙醇酯在食品中的分布 |
| 1.3 3-氯丙醇酯的形成机理 |
| 1.3.1 3-氯丙醇酯的有机合成方法 |
| 1.3.2 3-氯丙醇酯的分子形成机理 |
| 1.4 3-氯丙醇酯的检测方法 |
| 1.4.1 间接检测法 |
| 1.4.2 直接检测法 |
| 1.5 3-氯丙醇酯的毒性研究 |
| 1.5.1 3-氯丙醇酯的急性毒性研究 |
| 1.5.2 3-氯丙醇酯的亚急性毒性研究 |
| 1.5.3 3-氯丙醇酯的亚慢性毒性研究 |
| 1.5.4 3-氯丙醇酯的体外毒性研究 |
| 1.6 3-氯丙醇酯的代谢研究 |
| 1.7 3-氯丙醇酯的生物组学研究 |
| 1.7.1 3-氯丙醇酯的蛋白质组学研究 |
| 1.7.2 3-氯丙醇酯的代谢组学研究 |
| 1.8 论文研究意义与内容 |
| 1.8.1 研究意义 |
| 1.8.2 研究内容 |
| 第二章 3-氯丙醇酯的合成及结构鉴定 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验试剂 |
| 2.2.2 实验耗材与仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 3-氯丙醇酯的合成与纯化方法 |
| 2.3.2 液相串联飞行时间质谱检测方法 |
| 2.3.3 核磁共振检测方法 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 3-氯丙醇酯的合成与纯化方法比较 |
| 2.4.2 3-氯丙醇酯的结构鉴定 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 3-氯丙醇酯的亚慢性毒性作用研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验试剂 |
| 3.2.2 实验耗材与仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 动物实验 |
| 3.3.2 血液采集与血常规指标测定 |
| 3.3.3 组织切片及苏木精-伊红染色 |
| 3.3.4 统计分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 动物状态、体重及脏器重量 |
| 3.4.2 血常规指标分析 |
| 3.4.3 组织病理学 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 3-氯丙醇酯的肾脏毒性作用机制研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与仪器 |
| 4.2.1 实验试剂 |
| 4.2.2 实验耗材与仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 肾功能血清生化指标测定 |
| 4.3.2 蛋白质组学分析 |
| 4.3.3 蛋白免疫印迹分析 |
| 4.3.4 平行反应监测分析 |
| 4.3.5 细胞培养 |
| 4.3.6 细胞存活率测定 |
| 4.3.7 细胞转染 |
| 4.3.8 基因表达量测定 |
| 4.3.9 流式细胞仪分析 |
| 4.3.10 统计分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 肾功能血清生化指标 |
| 4.4.2 蛋白质组学分析 |
| 4.4.3 蛋白质组学结果验证 |
| 4.4.4 细胞存活率分析 |
| 4.4.5 细胞毒性机制分析 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 3-氯丙醇酯的睾丸毒性作用机制研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与仪器 |
| 5.2.1 实验试剂 |
| 5.2.2 实验耗材与仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 血清中炎症因子与睾酮含量测定 |
| 5.3.2 蛋白质组学分析 |
| 5.3.3 蛋白免疫印迹分析 |
| 5.3.4 平行反应监测分析 |
| 5.3.5 细胞培养 |
| 5.3.6 细胞存活率测定 |
| 5.3.7 细胞转染 |
| 5.3.8 基因表达量测定 |
| 5.3.9 流式细胞仪分析 |
| 5.3.10 统计分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 血清中炎症因子与睾酮含量 |
| 5.4.2 蛋白质组学分析 |
| 5.4.3 蛋白质组学结果验证 |
| 5.4.4 细胞存活率分析 |
| 5.4.5 细胞毒性机制分析 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 3-氯丙醇酯在体内的代谢组学研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料与仪器 |
| 6.2.1 实验试剂 |
| 6.2.2 实验耗材与仪器 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 样品采集 |
| 6.3.2 样品制备 |
| 6.3.3 液相串联飞行时间质谱检测方法 |
| 6.3.4 代谢组学分析 |
| 6.3.5 统计分析 |
| 6.4 结果与讨论 |
| 6.4.1 代谢组学分析 |
| 6.4.2 生物学标志物的鉴定 |
| 6.5 本章小结 |
| 第七章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 谢辞 |
| 博士在读期间科研成果 |
（5）百草枯中毒模型建立及辅酶Q10解毒药效作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 百草枯的研究进展 |
| 1.1.1 百草枯的使用现状 |
| 1.1.2 百草枯中毒临床症状 |
| 1.1.3 百草枯中毒对肺部的损伤 |
| 1.1.4 百草枯中毒的机制 |
| 1.1.5 百草枯中毒的临床治疗 |
| 1.2 辅酶Q10的药理作用 |
| 1.3 百草枯中毒实验动物模型研究进展 |
| 1.4 本论文的研究目的与意义 |
| 1.5 本论文的设计思路 |
| 第2章 辅酶Q10对百草枯中毒秀丽隐杆线虫作用的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2.2 实验主要仪器 |
| 2.2.3 培养基及试剂配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 线虫培养实验 |
| 2.3.2 百草枯中毒秀丽隐杆线虫模型建立实验 |
| 2.3.3 线虫寿命实验 |
| 2.3.4 线虫体内ROS测定实验 |
| 2.3.5 线虫RT-q PCR实验 |
| 2.3.6 转基因线虫荧光实验 |
| 2.3.7 线虫匀浆制备实验 |
| 2.3.8 BCA法检测线虫匀浆蛋白含量实验 |
| 2.3.9 线虫体内MDA测定实验 |
| 2.3.10 统计学处理 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 筛选建立百草枯中毒秀丽隐杆线虫模型条件 |
| 2.4.2 辅酶Q10对百草枯中毒线虫寿命的影响 |
| 2.4.3 辅酶Q10对百草枯中毒线虫ROS的影响 |
| 2.4.4 辅酶Q10对百草枯中毒线虫氧化应激基因mRNA表达的影响 |
| 2.4.5 辅酶Q10对百草枯中毒转基因线虫GST-4蛋白表达的影响 |
| 2.4.6 辅酶Q10对百草枯中毒线虫MDA的影响 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 辅酶Q10对百草枯中毒小鼠作用的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 |
| 3.2.2 实验主要仪器 |
| 3.2.3 实验动物 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 百草枯中毒小鼠模型建立实验 |
| 3.3.2 小鼠生存率统计实验 |
| 3.3.3 小鼠肺损伤模型建立实验 |
| 3.3.4 小鼠肺组织湿干重比值测定实验 |
| 3.3.5 小鼠肺组织ROS测定实验 |
| 3.3.6 小鼠肺组织匀浆制备实验 |
| 3.3.7 BCA法检测肺组织匀浆蛋白含量实验 |
| 3.3.8 小鼠肺组织SOD测定实验 |
| 3.3.9 小鼠肺组织MDA测定实验 |
| 3.3.10 肺组织石蜡切片制备 |
| 3.3.11 统计学处理 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 筛选建立百草枯中毒小鼠模型条件 |
| 3.4.2 辅酶Q10对百草枯中毒小鼠生存率的影响 |
| 3.4.3 辅酶Q10对百草枯中毒小鼠肺组织湿干重比的影响 |
| 3.4.4 辅酶Q10对百草枯中毒小鼠肺组织ROS的影响 |
| 3.4.5 辅酶Q10对百草枯中毒小鼠肺组织SOD的影响 |
| 3.4.6 辅酶Q10对百草枯中毒小鼠肺组织MDA的影响 |
| 3.4.7 辅酶Q10对百草枯中毒小鼠肺组织病理的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 结论与展望 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 创新点 |
| 4.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）MGST1在肺腺癌中的表达意义及对肺腺癌细胞的作用机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 MGST1在肺腺癌组织中的表达及其临床意义研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 第二部分 MGST1在肺腺癌细胞中的生物学功能研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 第三部分 MGST1对肺腺癌细胞调控作用的机制研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 研究创新性与不足之处 |
| 综述 微粒体谷胱甘肽S转移酶1的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（7）香烟烟雾所致大鼠肝脏毒性作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 内容与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验受试物 |
| 1.3 实验主要试剂 |
| 1.4 实验主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 动物模型制作 |
| 2.3 标本采集 |
| 3 指标检测 |
| 4 统计方法 |
| 5 技术路线图 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间获得的学术成果 |
| 导师评阅表 |
（8）环境内分泌干扰物-硫酸镍暴露对大鼠肝脏和肾脏组织氧化应激指标的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1 镍的一般毒性作用及机制 |
| 1.1 镍的一般特点 |
| 1.2 镍的来源、含量及应用 |
| 1.3 镍在体内的代谢过程 |
| 1.4 镍的毒性作用 |
| 1.5 镍的毒性机理 |
| 2 氧化损伤 |
| 2.1 氧化-抗氧化系统 |
| 2.2 镍与氧化应激 |
| 2.3 Nrf2/Keap-1 通路 |
| 3 研究的目的意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 动物 |
| 2.1.2 实验器材及试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 动物模型及分组 |
| 2.2.2 大鼠的一般情况及体重监测 |
| 2.2.3 血清ALT、AST、BUN、Cr检测 |
| 2.2.4 组织匀浆的制备 |
| 2.2.5 组织中蛋白和MDA含量以及SOD活力的检测 |
| 2.2.6 荧光定量PCR法检测肝肾组织Nrf2和HO-1 的基因水平 |
| 2.3 统计学分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 大鼠的一般情况及体重的变化 |
| 3.2 NiSO_4染毒对大鼠肝脏的影响 |
| 3.2.1 血清ALT、AST水平的变化 |
| 3.2.2 大鼠肝组织MDA含量及SOD活力的变化 |
| 3.2.3 大鼠肝组织Nrf2和HO-1mRNA的表达 |
| 3.3 NiSO_4染毒对大鼠肾脏的影响 |
| 3.3.1 血清BUN、Cr水平的变化 |
| 3.3.2 大鼠肾组织MDA含量及SOD活力的变化 |
| 3.3.3 大鼠肾组织Nrf2和HO-1mRNA的表达 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 NiSO_4对大鼠体重的影响 |
| 4.2 NiSO_4染毒对大鼠肝脏的影响 |
| 4.2.1 对血清ALT、AST水平的影响 |
| 4.2.2 对肝组织MDA含量和SOD活力的影响 |
| 4.2.3 对肝组织Nrf2和HO-1mRNA表达水平的影响 |
| 4.3 NiSO_4染毒对大鼠肾脏的影响 |
| 4.3.1 对血清BUN、Cr水平的影响 |
| 4.3.2 对肾组织MDA含量和SOD活力的影响 |
| 4.3.3 对肾组织Nrf2和HO-1mRNA的表达水平的影响 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词表 |
| 实验动物伦理审查表 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（9）微粒体环氧化物水解酶在香烟诱导的慢性阻塞性肺疾病小鼠肺损伤过程的作用探索（论文提纲范文）
| 附录 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一章 香烟烟雾诱导的COPD小鼠mEH和 Nrf2 基因表达水平变化 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 结果 |
| 1.成功构建香烟烟雾诱导的小鼠COPD模型 |
| 2.香烟烟雾诱导的COPD模型小鼠mEH和 Nrf2 mRNA表达水平变化 |
| 3.香烟烟雾诱导的COPD小鼠mEH和 Nrf2蛋白表达水平变化 |
| 4.小鼠血浆及支气管肺泡灌洗液中mEH的表达变化 |
| 讨论 |
| 第二章 Nrf2 调控香烟烟雾提取物诱导BEAS-2B细胞mEH的表达 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 结果 |
| 1.香烟烟雾提取物的制备(OD测定) |
| 2.香烟烟雾提取物对BEAS-2B细胞毒性的测定 |
| 3.香烟烟雾提取物干预不同时间点对BEAS-2B细胞Nrf2 mRNA的表达 |
| 4.香烟烟雾提取物诱导的BEAS-2B细胞mEH和 Nrf2 mRNA表达水平 |
| 5.香烟烟雾提取物诱导BEAS-2B细胞mEH和 Nrf2蛋白表达 |
| 6.Nrf2 siRNA干扰效率验证 |
| 7.Nrf2 siRNA对香烟烟雾提取物诱导BEAS-2B细胞mEH mRNA表达水平的影响 |
| 8.Nrf2si RNA对香烟烟雾提取物诱导的BEAS-2B细胞m EH蛋白表达水平的影响 |
| 讨论 |
| 第三章 mEH对香烟烟雾提取物诱导的BEAS-2B细胞炎症反应的作用 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 结果 |
| 1.mEH siRNA的筛选及干扰效率的验证 |
| 2.mEH siRNA对香烟烟雾提取物诱导的BEAS-2B细胞m EH mRNA表达水平的影响 |
| 3.细胞培养上清液中细胞因子IL-6、IL-8 水平 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（10）金水六君煎治疗慢性阻塞性肺疾病阴虚痰饮作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩写词表 |
| 引言 |
| 第一部分 慢性阻塞性肺疾病大鼠“阴虚痰饮”病证结合模型建立初探 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 造模 |
| 2.3 中药干预 |
| 2.4 标本留取 |
| 2.5 指标检测 |
| 2.6 统计学处理方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠一般情况 |
| 3.2 各组大鼠肺功能情况 |
| 3.3 各组大鼠肺组织病理形态学变化 |
| 3.4 各组大鼠气道杯状细胞计数及MUC5AC表达量 |
| 3.5 各组大鼠血清ACTH、CORT含量变化情况 |
| 3.6 各组大鼠血清cAMP、cGMP含量及红细胞Na-K-ATP酶活性变化 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 金水六君煎对COPD“阴虚痰饮”证大鼠气道黏液高分泌MUC5AC、AQP5 表达的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 分组、造模与给药 |
| 2.2 指标检测 |
| 2.3 统计学处理方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠肺组织气道杯状细胞计数 |
| 3.2 各组大鼠肺组织MUC5AC、AQP5 基因表达 |
| 3.3 各组大鼠肺组织MUC5AC、AQP5 蛋白表达 |
| 4.讨论 |
| 第三部分 金水六君煎及其拆方含药血清对A549 黏液高分泌细胞模型的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 细胞株 |
| 1.3 实验药物 |
| 1.4 实验试剂 |
| 1.5 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 含药血清制备 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 细胞分组及干预 |
| 2.4 指标检测 |
| 2.5 统计学处理方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 金水六君煎及其拆方含药血清对A549 细胞活力的影响 |
| 3.2 金水六君煎及其拆方含药血清对A549 细胞MUC5AC、AQP5 基因表达的影响 |
| 3.3 金水六君煎及其拆方含药血清对A549 细胞MUC5AC、AQP5 蛋白表达的影响 |
| 3.4 金水六君煎及其拆方含药血清对A549 细胞培养液中MUC5AC、AQP5 蛋白表达的影响 |
| 4.讨论 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
四、吸烟对大鼠血清及肺组织谷胱甘肽S-转移酶活性的影响（论文参考文献）
- [1]大气PM2.5及其它污染因子致肺损伤分子机制研究[D]. 赵利芳. 山西大学, 2021(01)
- [2]基于氧化应激及炎症反应探讨尺泽穴位注射NS对COPD大鼠的作用机制[D]. 黄培炜. 福建中医药大学, 2021(09)
- [3]阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征与肝损伤的相关性及机制研究[D]. 陈理达. 福建医科大学, 2021(02)
- [4]3-氯丙醇酯在大鼠体内的亚慢性毒性作用及其机制研究[D]. 杨普煜. 上海交通大学, 2020(01)
- [5]百草枯中毒模型建立及辅酶Q10解毒药效作用研究[D]. 季鹏. 长春理工大学, 2020(01)
- [6]MGST1在肺腺癌中的表达意义及对肺腺癌细胞的作用机制研究[D]. 曾宝真. 昆明医科大学, 2020
- [7]香烟烟雾所致大鼠肝脏毒性作用及其机制研究[D]. 黄小溪. 新疆医科大学, 2020(07)
- [8]环境内分泌干扰物-硫酸镍暴露对大鼠肝脏和肾脏组织氧化应激指标的影响[D]. 张丽. 兰州大学, 2020(01)
- [9]微粒体环氧化物水解酶在香烟诱导的慢性阻塞性肺疾病小鼠肺损伤过程的作用探索[D]. 王剑铭. 福建医科大学, 2019(07)
- [10]金水六君煎治疗慢性阻塞性肺疾病阴虚痰饮作用机制研究[D]. 刘雨. 湖南中医药大学, 2019(02)