一、豚鼠耳蜗毛细胞静纤毛的扫描电镜观察（论文文献综述）
李敏[1]（2020）在《非球形地塞米松微晶缓释制剂合成及其内耳局部递送研究》文中研究说明感音神经性耳聋,尤其突发性耳聋,呈现年轻化、职业化和社会化的趋势,严重影响患者的工作能力与生活质量。然而由于血-迷路屏障的存在以及高血压、糖尿病等基础病使临床给药途径、药物种类和疗效受到制约,为降低激素的副作用并合理的跨越内耳屏障,结合临床实际,本研究通过沉淀法合成非球形地塞米松微晶（dexamethasone microcrystals,DEX MCs）及其层层自组装（layer-by-layer assembly,LbL）表面功能化非球形地塞米松微晶缓释制剂（silk-coated dexamethasone microcrystals,DEX-（PLL/SF）3）,并开展体内外评价。体外评价其理化特性包括形状、晶型、分散性、溶出度及体外释放情况;在动物水平上,考察其在豚鼠圆窗膜（round window membrane,RWM）的分布情况,内耳局部跨RWM缓释行为及其生物相容性,为临床内耳病早期局部给药提供新的给药策略。本文的研究工作主要分为以下三个部分:1.采用沉淀法制得形状规则的菱形DEX MCs,考察了聚乙烯醇（Poly（vinyl alcohol）,PVA）浓度、搅拌速度、溶剂体积比、温度及溶剂种类等因素对DEX MCs形状以及尺寸的影响,优化出尺寸约为7.68 μm,厚度约为750 nm的DEX MCs,且DEX晶型由晶型A转变为晶型B。并以DEX MCs作为模板,以聚赖氨酸（poly（L-lysine）,PLL）及丝素蛋白（silk fibroin,SF）为壳层材料,LbL组装法合成DEX-（PLL/SF）3。相比于地塞米松原料药（raw dexamethasone,raw DEX）,DEX MCs及DEX-（PLL/SF）3更易分散;DEX MCs溶出速率更快;DEX-（PLL/SF）3在体外可持续释放2 d。2.在动物水平上,DEX-（PLL/SF）3经豚鼠鼓室给药后可均匀分布在RWM上,并且可缓慢、持续地递送DEX至内耳,增加给药剂量,外淋巴液中DEX浓度增加且在内耳的持续释放时间增加。3.DEX-（PLL/SF）3体内外生物相容性良好。DEX-（PLL/SF）3经豚鼠鼓室给药后RWM及血管纹的紧密连接及微绒毛良好、无缺损,耳蜗毛细胞无缺失及其静纤毛、表皮板结构完整,螺旋神经节细胞无变性及髓鞘脱落情况,内耳组织无炎症产生。
姚青秀[2]（2019）在《αⅡ血影蛋白参与耳蜗毛细胞静纤毛形态及听功能维持》文中进行了进一步梳理目的:通过免疫共沉淀和质谱分析筛选与肌球蛋白VI相互作用的蛋白,并探索αⅡ血影蛋白参与耳蜗毛细胞静纤毛结构稳定的机制。方法:提取SD大鼠耳蜗蛋白,免疫共沉淀联合质谱分析筛选与肌球蛋白VI相互作用的蛋白。选取αⅡ血影蛋白,通过免疫荧光和Western blot分析正常C57BL/6J小鼠αⅡ血影蛋白在耳蜗毛细胞的时-空分布;利用CRISPR/Cas9技术构建αⅡ血影蛋白敲除小鼠,并以雄性和雌性纯合子(Gfi1-cre-/+;Sptan1f/f)及其同窝对照(Gfi1-cre-/+;Sptan1f/+)作为实验组和对照组。两组小鼠在1月时行听性脑干反应、复合动作电位等听功能评估,再通过免疫荧光、扫描电镜、透射电镜等技术,观察静纤毛和毛细胞胞体变化;通过琥珀酸脱氢酶染色进行毛细胞计数,探索毛细胞缺失情况;通过Caspase-3染色,探索毛细胞凋亡情况;通过免疫荧光等技术观察βⅡ血影蛋白表达情况,探索αⅡ与βⅡ血影蛋白相互作用情况;通过FM1-43探索毛细胞功能情况。结果:通过免疫共沉淀和质谱分析发现了20余种与肌球蛋白VI相互作用的蛋白,其中αⅡ血影蛋白在表皮板与肌球蛋白VI共表达。之后研究发现正常C57BL/6J小鼠的αⅡ血影蛋白表达量在出生后1天和3天时明显高于7天和30天。基因敲除小鼠在1月龄时表现为早发性听力下降,外毛细胞静纤毛形态异常随着出生时间的延长而逐渐加重,出生后15天时部分外毛细胞表现为静纤毛根部不发育且出现约40%缺失,1月时出现约80%缺失。部分外毛细胞出现凋亡,残存的毛细胞功能尚存在。此外,基因敲除小鼠缺失αⅡ血影蛋白的毛细胞也缺失βⅡ血影蛋白。结论:共发现20余种与肌球蛋白Ⅵ相互作用的蛋白质,其中αⅡ血影蛋白对耳蜗毛细胞静纤毛形态及毛细胞的存活至关重要,缺乏会导致听力下降及静纤毛形态异常等。
金冶成[3]（2016）在《Brg1在小鼠内耳毛细胞中的功能研究》文中提出耳聋是人类常见的残疾性疾病之一。全球范围内约有2.78亿人患听力残疾。我国第二次残疾人抽样调查结果显示,我国现有听力残疾者2780万人,占所有残疾人总数的34%,并约以每年3万聋儿的速度持续增长。耳聋按照病因可分为两大类:遗传因素所致的耳聋和环境因素所致耳聋。内耳对于声音的感知至关重要,而毛细胞是内耳中感知声音和平衡的重要感受器,毛细胞的功能异常和耳聋有密切的联系。毛细胞和支持细胞是构成柯蒂氏器的两种主要细胞类型,毛细胞和支持细胞通过特殊的细胞连接形成复杂而精密的结构。由于基因突变导致这一结构无法正常形成,或者后期由于环境因素病变导致这一结构的破坏都会引起听力的缺失。毛细胞作为一种终末分化细胞,在哺乳动物里分化形成后就不具备分裂的能力,一旦死亡便不能再生,所以在老年人中耳聋非常普遍。因此,如何使毛细胞再生来修复损伤的听力成为现在治疗耳聋的一个重要议题。现已对毛细胞退出细胞周期的调控以及维持分裂静止状态的机制进行了一些探索,并且发现在·些细胞周期蛋白敲除以后毛细胞能重新进入细胞周期并产生新的毛细胞,但这些成果离用毛细胞再生.来修复听力还相去甚远,需要大量进一步探索来实现这一目标。总之,毛细胞的正常分化发育以及后期的损伤修复对听力起到至关重要的作用,在这一过程中有太多未知需要我们探索。Brg1是哺乳动物中BAF（Brg/Brm associated factor）复合物的核心水解酶亚基,最初是20世纪90年代在酿酒酵母中发现的。Brg1蛋白由多个功能结构域组成,通过这些结构域,Brg1能与多种蛋白质结合并相互作用。Brg1全身性无义突变的小鼠在胚胎发育早期死亡,证明Brg1在发育过程中有非常重要的作用。Brg1被报导与肿瘤形成有关,是一个抑癌基因,并且参与到Rb介导的细胞周期阻滞当中。Brg1在许多组织中的功能已经被研究过,但是Brg1在内耳毛细胞的功能研究还没有被报导过。Shh信号通路以及Wnt信号通路对于毛细胞的分化和发育都至关重要,并且Rb对于毛细胞的细胞周期调控起到关键的作用。Brg1在毛细胞发育过程中是否也参与到Shh信号通路以及Wnt信号通路的调节中,或者Brg1在Rb调控的毛细胞的细胞周期静止状态是否也起到重要作用?我们想要建立Brg1缺失的动物模型来研究Brg1在毛细胞发育过程中的作用,以期为毛细胞分化、发育以及再生修复的研究提供一些理论依据。小鼠是一种常用的人类疾病模型,有繁殖能力强、与人类基因组高度同源、基因组修饰技术成熟等优势。我们用小鼠作为动物模型来研究Brg1的功能。Brg1全身性失活小鼠模型胚胎早期致死,给Brg1功能的研究造成了一定的障碍。我们用Cre-LoxP重组酶系统制作了 Brg1条件敲除小鼠模型来解决这一问题。我们用Pax2-Cre、Atoh1-Cre和Gfi1-Cre三种不同的Cre小鼠对Brg1进行条件敲除。Pax2-Brg1’/’小鼠在胚胎期致死,并且Brg1在听泡阶段就被敲除,导致听泡发育异常而无法发育出毛细胞。Atoh1-Brg1’/’小鼠能正常存活和繁殖,并且我们验证了 Brg1在Atoh1-Brg1-/’小鼠内耳毛细胞中被特异性敲除,可以作为研究Brg1功能的小鼠模型。通过初步研究发现Brg1在耳蜗毛细胞敲除之后使毛细胞快速死亡并引起严重的耳聋。对Atoh1-Brg1-/-小鼠耳蜗进行细胞周期蛋白免疫荧光染色分析我们发现Brg1敲除后耳蜗毛细胞虽表现出一些细胞周期的特征,但并没有重新进入细胞周期。进一步研究发现Brg1对于耳蜗毛细胞的正常结构发育非常重要。Brg1敲除导致外毛细胞的表面极性被破坏,外毛细胞的底部锚定异常,疤痕形成受阻。免疫荧光染色发现外毛细胞上表面Gαi/mInsc/LGN和aPKC的非对称分布被破坏,顶部微管网络出现异常。另外,我们还证明毛细胞在死亡早期的时候表现为细胞凋亡,但是在毛细胞凋亡后由于疤痕形成受阻造成网状板破损,高钾的内淋巴液进入柯蒂氏器造成毛细胞大量坏死。在前庭中,Brg1缺失的毛细胞能存活很长时间,到12个月大的时候才发现少量的毛细胞缺失。在Atoh1-Brg1-/-小鼠前庭毛细胞中,出生3个月以后观察到了明显的静纤毛融合,并且许多融合后的静纤毛长度明显变长。之后,通过分析Gfi1-Brg1-/-小鼠表型我们还验证了 Brg1缺失的毛细胞自身足以引起这些表型缺陷。由这些表型我们可以看出Brg1在对于毛细胞正常发育过程中起着重要的作用,并且对于柯蒂氏器的损伤修复也至关重要,对于Brg1在毛细胞中功能的深入研究可以为耳聋的治疗提供更多理论依据。
李胜利,朱宏亮,刘艳平,刘全征,王玮,史士合[4]（2016）在《中药复聪汤拮抗庆大霉素耳中毒的研究》文中进行了进一步梳理目的:用纯中药制剂复聪汤拮抗庆大霉素（GM）耳中毒性,观察对耳蜗毛细胞和听神经的保护效果。方法:选用60只健康青年豚鼠,分成GM拮抗组,GM对照组和正常对照组,每组20只。GM拮抗组动物给予GM连续肌肉注射的同时口服纯中药制剂复聪汤拮抗连续30d,GM对照组动物仅GM连续肌肉注射30d。分别在治疗30、60、90d后测定动物的听功能（ABR,DPOAE）后处死6只动物,耳蜗行扫描电镜和光镜观察及毛细胞计数。结果:在连续30d的GM注射的GM拮抗组和GM对照组ABR平均阈值上升;GM拮抗组在中药拮抗30d后,豚鼠的ABR反应阈值明显上升,DPOAE幅值有较明显降低;耳蜗铺片显示耳蜗外毛细胞（OHC）的存活数目明显下降,扫描电镜观察到耳蜗OHC大量损害消失,静纤毛束折断。在拮抗治疗60d后,耳蜗毛细胞数目明显增多;GM拮抗组到90d后的耳蜗毛细胞形态整体基本完好,并可见到支持细胞转分化为新生毛细胞现象,且听功能已基本恢复正常。结论:在注射GM的同时给予中药进行拮抗治疗,反而加重了耳蜗毛细胞的损害,而在后期的连续中药治疗可以在一定程度上促进耳蜗受损毛细胞的修复和听功能的改善。
徐海艳,吴玮,王刚,韩浩伦,李保卫,王鸿南,刘旭[5]（2016）在《低频强声对巴马香猪听功能及耳蜗毛细胞表面结构的影响》文中提出目的了解高强度低频率噪声（低频强声）对巴马香猪听功能及耳蜗毛细胞表面结构的影响。方法将8只巴马香猪随机分为对照组（2只）及实验组（6只）,均于实验前行听性脑干反应（auditory brainstem response,ABR）检测后,将实验组再分为噪声暴露后即刻、36小时及84小时组,每组2只;实验各组动物暴露于50Hz、142dB SPL的低频噪声中5min,再于暴露后即刻、36小时、84小时分别行ABR检测,然后分别在扫描电镜下观察各组动物耳蜗毛细胞表面结构的形态变化。对照组不给予噪声暴露,其他步骤同实验组。结果 8只（16耳）巴马香猪低频强声暴露前ABR反应阈值为91.25±10.72dB SPL;实验组低频强声暴露后即刻、36h及84h所有动物双耳ABR均未能引出。实验组噪声暴露后即刻扫描电镜下可见内外毛细胞气球样变,外毛细胞静纤毛融合及散在性缺失;噪声暴露后36h可见内外毛细胞轻度气球样变、静纤毛散乱;噪声暴露后84h可见耳蜗底回内外毛细胞缺失,中回及顶回内外毛细胞静纤毛缺失,且以第三排外毛细胞静纤毛缺失最重;噪声暴露后听毛细胞表面结构损伤以基底回和中回为主,顶回损伤较轻。结论 50Hz、142dB SPL噪声暴露后巴马香猪双耳ABR反应阈值较暴露前明显升高;扫描电镜下可见内、外毛细胞静纤毛融合、散乱及缺失等改变。
张媛媛,肖自安,李秀国[6]（2014）在《镍钛合金听泡植入对豚鼠耳蜗及听功能的毒性》文中认为背景:镍钛合金多作为自膨胀支架和封堵器的材料应用已很成熟,但镍钛合金作为听骨链重建材料的相关研究及临床应用至今少有报道。目的:观察镍钛合金植入体在豚鼠听泡中的耳毒性。方法:健康听敏纯白红目豚鼠50只,每只豚鼠其中一侧耳为镍钛合金植入组,其中25只对侧耳为钛植入组,另25只对侧耳为空白植入组。分别于植入后7,14,28,56,112 d随机处死含钛植入组和空白植入组的豚鼠各5只,对各组行近中轴位耳蜗石蜡切片苏木精-伊红染色观察耳蜗组织的形态变化,行耳蜗毛细胞核丫啶橙-碘化丙啶双重荧光染色观察毛细胞凋亡和缺失情况,行耳蜗基底膜扫描电镜观察毛细胞纤毛排列情况,透射电镜观察毛细胞细胞器形态,对各组的豚鼠植入前、不同时间点处死前均行听性脑干反应及畸变反应耳声发射检测。结果与结论:各组植入后各时间点耳蜗组织形态无明显变化,未发现耳蜗毛细胞发生凋亡,基底膜耳蜗毛细胞纤毛排列整齐,外耳蜗毛细胞的细胞器未见明显异常。植入前及植入后7,14,28,56,112 d听性脑干反应阈值差异无显着性意义,且畸变反应耳声发射检测通过率均为100%。结果证实,镍钛合金听泡植入对豚鼠耳蜗形态及听功能无明显影响,提示镍钛合金无明显耳毒性。
戴尉君,张健,吴建[7]（2013）在《Math1/神经生长因子β基因共转染对噪声性听力损伤豚鼠耳蜗毛细胞的保护作用》文中研究指明目的观察Math1基因（mouse atonal homologue 1 gene,Math1）及神经生长因子β基因（nerve growth factorbeta gene,NGEβ）共转染对噪声性听力损伤豚鼠耳蜗毛细胞的保护作用。方法选用35只白色纯种豚鼠,制备豚鼠稳态噪声耳聋模型（110 dB SPL）,噪声暴露前后分别行听觉脑干电位（auditory brainstem response,ABR）检测,选择噪声暴露前后听阈阈移大于60 dB SPL的豚鼠。采用数字表法随机分为4组,其中A组10只,为双基因组（导入目的基因Ad-Math1/NGFβ）;B组10只,为Math1组（导入目的基因Ad-Math1）;C组10只,为NGF组（导人目的基因Ad-NGFβ）;D组5只,为对照组（导入空病毒）。基因转染后,进行ABR反应阈测定、免疫荧光染色检测基因蛋白表达,并用电镜扫描观察耳蜗毛细胞。结果基因转染后1周,Ad-Math1/NGFβ、Ad-Math1、Ad-NGEβ在豚鼠耳蜗内成功转染,耳蜗各回膜性组织均有表达,强度基本相等;A组双基因转染豚鼠ABR反应阈恢复显着快于B、C组单基因转染豚鼠ABR反应闽;转染后2周,A组豚鼠ABR[（37.6±2.8）dB SPL]已基本恢复正常,而B、C组豚鼠ABR[（45.3±2.5）dB SPL及（47.5±3.1）dB SPL]没有恢复正常,D组豚鼠ABR没有恢复[（75.7±3.4）dB SPL],A组与其他3组比较,差异均有统计学意义（P<0.01）。扫描电镜示:噪声暴露后可见各组豚鼠耳蜗毛细胞静纤毛融合及缺失;基因转染后1周,A组豚鼠耳蜗可见新生毛细胞出现,其他组豚鼠耳蜗未见新生毛细胞;转染后2周,A组豚鼠耳蜗新生毛细胞数量增加,B、C、D组豚鼠耳蜗未见新生耳蜗毛细胞。结论 Math1/NGFβ基因共转染在噪声损伤后豚鼠耳蜗中能高效表达,对噪声性听力损伤的保护作用明显优于单基因转染。
李胜利,朱宏亮,刘全征,王玮,刘平艳,史士合[8]（2013）在《中药复聪汤拮抗庆大霉素耳中毒的实验研究分析》文中研究指明目的:耳毒性药物是造成听神经和耳蜗毛细胞退变和破坏消失的主要因素,目前公认其具有不可逆性。我们用纯中药制剂复聪汤拮抗庆大霉素（GM）耳中毒的动物进行治疗观察,观察其对听神经和耳蜗毛细胞的保护作用效果。方法:选用50只健康青年豚鼠,分成GM注射拮抗组（A）20只,GM注射对照组（B）和正常对照组（C）各15只。听力学检查后A组动物给予GM连续肌肉注射的同时口服纯中药制剂复聪汤拮抗连续30d,B组动物仅GM连续肌肉注射30d,而C组动物用于正常对照组。在治疗30d,60d和90d后测定实验动物的听功能（ABR,DPOAE）,处死5只动物,耳蜗左侧扫描电镜观察,右侧耳蜗铺片行光镜观察和毛细胞计数。对照组给予同样方法注射和口服生理盐水。结果:实验前ABR和DPOAE测定所有受试豚鼠的听功能正常,ABR平均阈值22.5dB SPL,DPOAE幅值在正常范围;在连续30d的GM注射的拮抗A组,ABR平均阈值37.5dB SPL,B组豚鼠ABR反应阈值上升到45.15dB SPL,说明耳蜗毛细胞和听神经受损;A组在用复聪汤口服拮抗30d后,80%的耳聋豚鼠的ABR反应阈值明显上升到40到80dB SPL,DPOAE幅值有较明显降低;耳蜗铺片和电镜观察显示耳聋豚鼠的耳蜗毛细胞的存活数目明显下降,耳蜗毛细胞扫描电镜观察到第一回OHC大量损害消失,第二回和第三回OHC消失和静纤毛束折断,Corti器表面有胞浆溢出的球状物。在纯中药拮抗治疗60d时,耳蜗毛细胞数目明显增多,豚鼠耳蜗扫描电镜观察可见第一回有散在的OHC损害消失,第二回OHC损害的静纤毛不是很整齐,纤毛上的胞浆溢出物尚可见到,而第三到第四回的毛细胞基本完好,未见明显的毛细胞和基底膜损害;GM拮抗组90d后的耳蜗毛细胞形态整体基本完好,未见大量的毛细胞消失,仅第三回和顶回的第三排OHC有少量消失,静纤毛束多基本正常,尤其是耳蜗基底部位的毛细胞明显增多,昕功能已基本正常,但耳蜗顶回有一定程度的毛细胞消失。结论:本课题组进行的动物实验研究表明在注射GM的同时给予中药进行拮抗治疗,其结果适得其反,拮抗剂反而加重了耳蜗毛细胞的损害,而在后期的连续中药治疗中可以在一定程度上促进耳蜗受损毛细胞的修复和听功能的改善。
吴玮,韩浩伦,王方园,屈昌北,王刚,王鸿南,李保卫,余萌,孟令照,王普杰,虞学军,吴大蔚,牛聪敏,刘钢[9]（2013）在《习服后风洞噪声相关听力损失易感性及其耳蜗超微结构变化》文中提出目的研究噪声习服后暴露和直接暴露于风洞噪声条件下豚鼠听力损失的易感性,和其耳蜗超微结构的变化。方法健康成年豚鼠100只随机分为习服后暴露组和直接暴露组,暴露于习服噪声和风洞噪声,于实验前、习服后、暴露后分别测定听性脑干反应阈值。根据其变化筛选噪声性听力损失易感和非易感个体,并通过扫描电镜观察其耳蜗形态学变化。结果习服后暴露组高强度风洞噪声引起的听阈升高程度较直接暴露组轻,其耳蜗内、外毛细胞病变较直接暴露组轻,各组内易感个体毛细胞损伤较非易感个体明显严重。结论噪声习服可有效减少风洞噪声暴露引起的听力损失和毛细胞损伤,但暴露于相同噪声条件下,其听力损失和毛细胞损伤存在较大个体差异。
李胜利,樊小军,尹海荣,朱宏亮[10]（2013）在《实验豚鼠耳蜗外毛细胞静纤毛束变异的发生率分析》文中指出目的通过观察不同实验豚鼠模型的耳蜗外毛细胞（OHC）静纤毛束变异的发生率,探讨OHC变异发生的可能原因。方法 57只豚鼠给予80mg.kg-1.d-1庆大霉素连续注射30天（庆大霉素组）;33只豚鼠每天给予8小时96～100dB SPL的工业噪声连续暴露9天（噪声暴露组）;耳蜗OHC静纤毛束变异母体或父体豚鼠所产仔鼠22只,OHC静纤毛正常父母体豚鼠产仔鼠32只,另以20只正常豚鼠作为对照组。所有实验动物检测ABR和DPOAE后,用光镜和扫描电镜观察豚鼠耳蜗OHC静纤毛束变异情况。结果耳蜗各回均出现OHC静纤毛束变异,外毛细胞第一排（OHC1）最明显,而噪声暴露组耳蜗第二、三回变异最严重,蜗顶和基底回逐渐变轻,该组动物耳蜗OHC静纤毛束变异的发生率为30.30%;庆大霉素组耳蜗OHC静纤毛束变异发生率为7.02%,以耳蜗基底回较严重,向蜗顶减轻,正常对照组动物耳蜗OHC静纤毛束变异的发生率15.0%;而耳蜗OHC静纤毛束变异的母体豚鼠所产的仔鼠均未发现OHC静纤毛束变异的现象。结论耳蜗OHC静纤毛束变异并非遗传所致,噪声暴露可能是导致OHC静纤毛束变异的重要因素之一。
二、豚鼠耳蜗毛细胞静纤毛的扫描电镜观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、豚鼠耳蜗毛细胞静纤毛的扫描电镜观察（论文提纲范文）
（1）非球形地塞米松微晶缓释制剂合成及其内耳局部递送研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1. 内耳给药途径 |
| 1.1 经鼓室给药 |
| 1.2 耳后给药 |
| 1.3 内耳内直接给药 |
| 2. 药物递送系统 |
| 2.1 明胶海绵 |
| 2.2 水凝胶 |
| 2.3 纳米递送系统 |
| 2.4 微米递送系统 |
| 2.5 控释给药装置 |
| 3. 选题依据及研究内容 |
| 第二章 DEX-(PLL/SF)3的制备与表征 |
| 1. 仪器与材料 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 DEX MCs的制备 |
| 2.2 DEX-(PLL/SF)_3的制备 |
| 2.3 DEX单晶的制备 |
| 2.4 材料测试与表征 |
| 2.5 DEX-(PLL/SF)_3分散性的考察 |
| 2.6 DEX MCs溶出度的考察 |
| 2.7 DEX-(PLL/SF)_3体外释放的考察 |
| 3. 结果与讨论 |
| 3.1 DEX MCs的制备与表征 |
| 3.1.1 PVA浓度对DEX MCs尺寸及形状的影响 |
| 3.1.2 搅拌速度对DEX MCs尺寸及形状的影响 |
| 3.1.3 温度对DEX MCs尺寸及形状的影响 |
| 3.1.4 溶剂种类对DEX MCs尺寸及形状的影响 |
| 3.1.5 溶剂体积比对DEX MCs尺寸及形状的影响 |
| 3.2 DEX-(PLL/SF)_3的制备与表征 |
| 3.3 DEX-(PLL/SF)_3的分散性的考察 |
| 3.4 DEX含量测定的HPLC方法学考察 |
| 3.4.1 标准曲线的制备 |
| 3.4.2 精密度试验 |
| 3.4.3 回收率实验 |
| 3.5 DEX MCs溶出度的考察 |
| 3.6 DEX-(PLL/SF)_3体外释放的考察 |
| 4. 本章小结 |
| 第三章 DEX-(PLL/SF)_3在RWM的分布及药代动力学研究 |
| 1. 仪器与材料 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验动物 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 DEX-(PLL/SF)_3在RWM的分布情况考察 |
| 2.2 DEX-(PLL/SF)_3在内耳的药代动力学考察 |
| 3. 结果与讨论 |
| 3.1 DEX-(PLL/SF)_3经鼓室注射在RWM分布的情况 |
| 3.2 DEX-(PLL/SF)_3经鼓室注射在内耳的药代动力学特性 |
| 4. 本章小结 |
| 第四章 DEX-(PLL/SF)_3生物相容性的考察 |
| 1. 仪器与材料 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验动物 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 壳层材料的体外细胞毒性实验 |
| 2.2 DEX-(PLL/SF)_3在内耳组织的生物相容性的考察 |
| 2.2.1 动物操作 |
| 2.2.2 共聚焦观察内耳组织 |
| 2.2.3 临界点干燥观察内耳组织 |
| 2.2.4 内耳组织切片 |
| 2.2.5 HE染色 |
| 3. 结果与讨论 |
| 3.1 壳层材料的体外细胞毒性 |
| 3.2 DEX-(PLL/SF)_3在内耳组织的生物相容性 |
| 3.2.1 RWM、SV的超微结构观察 |
| 3.2.2 耳蜗毛细胞的超微结构观察 |
| 3.2.3 耳蜗组织学切片-HE染色 |
| 4. 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 1. 结论 |
| 2. 展望 |
| 参考文献 |
| 英文缩写注释 |
| 致谢 |
| 硕士期间取得的研究成果 |
（2）αⅡ血影蛋白参与耳蜗毛细胞静纤毛形态及听功能维持（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 绪论 |
| 参考文献 |
| 第一部分 耳蜗肌球蛋白Ⅵ相互作用蛋白筛选 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 Sptan1 基因敲除小鼠模型建立 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 基因敲除小鼠听功能测试及静纤毛形态研究 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 |
（3）Brg1在小鼠内耳毛细胞中的功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩写说明 |
| 前言 |
| 1 内耳毛细胞(Hair cells)简介 |
| 1.1 耳蜗的结构 |
| 1.2 毛细胞的发育 |
| 1.3 毛细胞的平面细胞极性(planer cell polarity, PCP) |
| 1.4 毛细胞与支持细胞之间的细胞连接 |
| 1.5 利用毛细胞再生治疗耳聋的探索 |
| 2 Brg1简介 |
| 2.1 Brg1与BAF复合物 |
| 2.2 Brg1的功能研究 |
| 2.3 Brg1与Sonic hedgehog(Shh)信号通路 |
| 2.4 Brg1与Wnt/β-catenin信号通路 |
| 2.5 Brg1与肿瘤 |
| 3 利用条件基因敲除技术研究Brg1在内耳毛细胞的功能 |
| 实验材料和仪器 |
| 1 实验动物 |
| 2 主要仪器设备 |
| 3 主要试剂 |
| 3.1 试剂配方 |
| 3.2 一抗 |
| 3.3 二抗 |
| 3.4 其他试剂 |
| 实验方法 |
| 1 鼠尾基因组提取 |
| 2 小鼠基因组鉴定 |
| 3 冰冻切片 |
| 4 冰冻切片免疫荧光染色 |
| 5 基底膜铺片免疫荧光染色 |
| 6 苏木精/伊红(HE)染色 |
| 7 BrdU检测 |
| 8 扫描电镜 |
| 9 透射电镜 |
| 10 ABR检查小鼠听力 |
| 11 基底膜体外培养 |
| 实验结果 |
| 1 Brg1在耳蜗发育过程中的表达模式 |
| 2 Pax2-Cre介导的Brg1条件敲除小鼠制作及表型 |
| 3 Atohl-Cre介导的Brg1条件敲除小鼠制作 |
| 4 毛细胞中Brg1的缺失引起严重的耳聋和耳蜗毛细胞死亡。 |
| 5 Brg1缺失的毛细胞在死亡早期发生细胞凋亡 |
| 6 Brg1缺失的耳蜗毛细胞的细胞核变大但没有进入细胞周期 |
| 7 Brg1缺失的耳蜗毛细胞静纤毛形态异常 |
| 8 Brg1缺失的耳蜗毛细胞表皮板发育异常 |
| 9 Brg1缺失的耳蜗毛细胞中动纤毛形态和发育异常 |
| 10 核心PCP成员Vangl1和Fz6在Atoh1-Brg1~(-/-)小鼠耳蜗听觉上皮上的分布没有异常 |
| 11 Brg1缺失的外毛细胞顶部Gαi/mInsc/LGN和aPKC的非对称分布出现异常 |
| 12 Brg1缺失的外毛细胞顶部微管网络出现异常 |
| 13 在Atoh1-Brg1~(-/-)小鼠耳蜗中外毛细胞排列混乱并且外毛细胞底部从DC细胞杯脱离 |
| 14 在Atoh1-Brg1~(-/-)小鼠耳蜗中疤痕形成异常 |
| 15 体外培养能部分拯救Atoh1-Brg1~(-/-)小鼠耳蜗毛细胞的死亡 |
| 16 Atoh1-Brg1~(-/-)小鼠耳蜗中的表型是由毛细胞自身的缺陷引起的 |
| 17 在年老的Atoh1-Brg1~(-/-)小鼠前庭中小部分毛细胞发生死亡 |
| 18 Atoh1-Brg1~(-/-)小鼠前庭中的毛细胞静纤毛融合变长 |
| 讨论 |
| 1 Brg1对外毛细胞自身的极性维持有重要作用 |
| 2 Brg1缺失导致毛细胞底部与支持细胞的锚定失败进而可能引起失巢凋亡(anoikis) |
| 3 Brg1缺失导致毛细胞死亡以后疤痕形成不能正常进行 |
| 4 Brg1缺失的前庭毛细胞静纤毛与耳蜗毛细胞静纤毛形态的差异 |
| 总结和展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（4）中药复聪汤拮抗庆大霉素耳中毒的研究（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 1.动物 |
| 2.药物 |
| 3.听功能测定方法 |
| 4.分组、造模及给药 |
| 5.耳蜗铺片及观察方法 |
| 6.扫描电镜观察方法 |
| 7.统计学方法 |
| 结果 |
| 1. DPOAE测定结果 |
| 1.1 GM拮抗组 |
| 1.2 GM对照组 |
| 1.3正常对照组 |
| 2.各组动物各时间点的ABR阈值变化 |
| 3. 耳蜗毛细胞损失及存活计数 |
| 3.1 GM对照组 |
| 3.2 GM拮抗组 |
| 3.3正常对照组 |
| 4. 扫描电镜观察结果 |
| 4.1 GM对照组 |
| 4.2 GM拮抗组 |
| 讨论 |
（5）低频强声对巴马香猪听功能及耳蜗毛细胞表面结构的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1实验动物及分组 |
| 1.2低频强噪声暴露方法 |
| 1.3听性脑干反应(ABR)测试 |
| 1.4耳蜗毛细胞扫描电镜观察 |
| 2 结果 |
| 2.1各组巴马香猪噪声暴露前后ABR反应阈比较 |
| 2.2耳蜗毛细胞扫描电镜观察 |
| 3 讨论 |
（6）镍钛合金听泡植入对豚鼠耳蜗及听功能的毒性（论文提纲范文）
| 文章亮点: |
| 0引言Introduction |
| 1 材料和方法Materials and methods |
| 设计 |
| 时间及地点: |
| 材料: |
| 实验动物: |
| Ni Ti: |
| 主要溶液: |
| 方法: |
| 分组及干预: |
| ABR测试 |
| DPOAE测试: |
| 耳蜗组织形态学观察: |
| 主要观察指标 |
| 统计学分析 |
| 2 结果Results |
| 2.1 实验动物数量分析 |
| 2.2 镍钛合金听泡植入后豚鼠耳蜗组织形态 |
| 2.3 豚鼠镍钛合金听泡植入前及植入后ABR阈值比较 |
| 2.4 豚鼠镍钛合金听泡植入前及植入后DPOAE比较 |
| 2.5 镍钛合金听泡植入后生物相容性及不良反应分析 |
| 3 讨论Discussion |
| 作者贡献: |
| 利益冲突: |
| 伦理要求: |
| 学术术语: |
| 作者声明: |
（9）习服后风洞噪声相关听力损失易感性及其耳蜗超微结构变化（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 噪声暴露 |
| 1.3 听性脑干反应 (ABR) 阈值测试 |
| 1.4 统计学方法 |
| 1.5 扫描电镜 |
| 2 结果 |
| 2.1 一般情况 |
| 2.2 噪声习服对ABR阈值的影响 |
| 2.3 扫描电镜检查结果, 见图1。 |
| 2.3.1 A组易感个体:损伤严重 |
| 2.3.2 A组非易感个体 |
| 2.3.3 B组易感个体: |
| 2.3.4 B组非易感个体: |
| 2.3.5 A、B组间与组内比较 |
| 3 讨论 |
四、豚鼠耳蜗毛细胞静纤毛的扫描电镜观察（论文参考文献）
- [1]非球形地塞米松微晶缓释制剂合成及其内耳局部递送研究[D]. 李敏. 北京协和医学院, 2020(05)
- [2]αⅡ血影蛋白参与耳蜗毛细胞静纤毛形态及听功能维持[D]. 姚青秀. 上海交通大学, 2019(06)
- [3]Brg1在小鼠内耳毛细胞中的功能研究[D]. 金冶成. 山东大学, 2016(05)
- [4]中药复聪汤拮抗庆大霉素耳中毒的研究[J]. 李胜利,朱宏亮,刘艳平,刘全征,王玮,史士合. 中华中医药杂志, 2016(02)
- [5]低频强声对巴马香猪听功能及耳蜗毛细胞表面结构的影响[J]. 徐海艳,吴玮,王刚,韩浩伦,李保卫,王鸿南,刘旭. 听力学及言语疾病杂志, 2016(01)
- [6]镍钛合金听泡植入对豚鼠耳蜗及听功能的毒性[J]. 张媛媛,肖自安,李秀国. 中国组织工程研究, 2014(21)
- [7]Math1/神经生长因子β基因共转染对噪声性听力损伤豚鼠耳蜗毛细胞的保护作用[J]. 戴尉君,张健,吴建. 中华航海医学与高气压医学杂志, 2013(06)
- [8]中药复聪汤拮抗庆大霉素耳中毒的实验研究分析[A]. 李胜利,朱宏亮,刘全征,王玮,刘平艳,史士合. “新成果·新进展·新突破”中华中医药学会2013年学术年会、第三次中华中医药科技成果论坛论文集, 2013
- [9]习服后风洞噪声相关听力损失易感性及其耳蜗超微结构变化[J]. 吴玮,韩浩伦,王方园,屈昌北,王刚,王鸿南,李保卫,余萌,孟令照,王普杰,虞学军,吴大蔚,牛聪敏,刘钢. 中华耳科学杂志, 2013(02)
- [10]实验豚鼠耳蜗外毛细胞静纤毛束变异的发生率分析[J]. 李胜利,樊小军,尹海荣,朱宏亮. 听力学及言语疾病杂志, 2013(04)