化学脱细胞同种异体移植物储存方法的初步研究

一、化学去细胞同种异体神经移植物储存方法的初步研究（论文文献综述）

戴依娜^[1]（2021）在《四种冷冻保护剂玻璃化法保存人指固有神经的实验研究》文中研究表明目的:评估二甲基亚砜、甘油、丙二醇、乙二醇四种冷冻保护剂在玻璃化法保存人指固有神经中的保护效果,筛选合适的人指固有神经冷冻保护剂,为人指固有神经的玻璃化法保存提供一定的理论依据。方法:取2018年10月到2020年10月在遵义医科大学第五附属（珠海）医院行截肢手术后病人放弃肢体的人指固有神经共75个片段,每段1cm,将75个片段随机分为5组（4个实验组,1个对照组）,每组15个片段,分别为:30%二甲基亚砜组、30%甘油组、30%乙二醇组、30%丙二醇组和空白对照组。实验组分别添加对应种类的冷冻保护剂使用玻璃化法于液氮（-196℃）中保存3周,空白对照组添加等体积浓度的无菌生理盐水使用玻璃化法在液氮（-196℃）中保存3周。复温后进行石蜡包埋切片,运用HE染色法观察人指固有神经的组织结构变化;应用钙黄绿素-AM（Calcien-AM）和碘化丙啶（Propidium iodide,PI）双染色激光共聚焦显微镜（Laser scanning confocal microscope,LSCM）检测神经组织生物活性;ELISA法检测体外培养后的指固有神经片段的神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）表达情况,应用统计学对各组间NGF浓度水平进行比较,分析各组间差异有无统计学意义。结果:1、HE染色结果:HE染色后光镜下观察见,空白对照组神经鞘膜结构模糊,神经纤维排列疏松、紊乱,局部有脱髓鞘改变;乙二醇组神经鞘膜基本完整,神经纤维排列整齐、紧凑;二甲基亚砜组神经鞘膜相对完整,神经纤维间存在间隙,但结构排列整齐;甘油组神经鞘膜偶见断裂,神经纤维结构较松散;丙二醇组神经鞘膜结构存在,完整性欠佳,神经纤维结构松散。2、激光共聚焦显微镜结果:Calcein-AM和PI双染色,LSCM观察见:空白对照组神经纤维绿色荧光（代表活细胞）轻度较弱,红色荧光（代表死细胞）强度较强,且广泛分布。各实验组绿色荧光较空白对照组均增强,红色荧光强度均减弱;实验组中乙二醇组绿色荧光强度最强,分布广泛,红色荧光最弱,分布范围有限;二甲基亚砜组次之;甘油组及丙二醇组神经荧光强度及分布情况相似,绿色荧光强度最弱,红色荧光强度最强。3、人NGF表达ELISA检测结果:实验组与空白对照组相比较,空白对照组NGF水平最低,各实验组NGF水平均较空白对照组明显增高,差异有统计学意义（P<0.05）。在实验组组间比较中,与乙二醇组比较,二甲基亚砜组、甘油组、丙二醇组NGF水平均较低,差异有统计学意义（P<0.05）;与二甲基亚砜组相比,乙二醇组NGF水平较高,差异有统计学意义（P<0.05）,甘油组及丙二醇组NGF水平较低,差异有统计学意义（P<0.05）;与甘油组相比,乙二醇组、二甲基亚砜组NGF水平较高,差异有统计学意义（P<0.05）,丙二醇组间比较无统计学差异（P>0.05）。与丙二醇组相比,乙二醇组、二甲基亚砜组NGF水平较高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1、乙二醇、二甲基亚砜、甘油、丙二醇对人指固有神经的玻璃化法保存有保护作用。2、30%体积浓度下,乙二醇对人指固有神经的玻璃化法保存的保护效果较二甲基亚砜、甘油、丙二醇好。3、30%体积浓度下,甘油与丙二醇对人指固有神经玻璃化保存的保护效果相似。

韩公海^[2]（2019）在《化学去细胞同种异体神经复合SVF细胞修复周围神经缺损的实验研究》文中认为[目 的]周围神经损伤是导致肢体残障的重要原因之一,全球每年至少有200万人存在周围神经损伤,造成严重的经济和生活负担。在缺损节段无法通过显微外科技术完成时,神经移植成为治疗周围神经损伤的方法之一。自体神经移植作为金标准存在一定的局限,因此寻找合适的周围神经缺损修复材料成为研究热点。基于组织工程的理念,种子细胞在神经损伤修复过程中同样扮演重要角色。本研究以坐骨神经细胞外基质（extracellular matrix,ECM）为神经导管,脂肪组织血管基质组分（stromal vascular fraction,SVF）和脂肪干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）为种子细胞在体内和体外评价其对神经细胞和大鼠坐骨神经损伤修复的作用,并对其有效性进行评价。[方 法]取SD大鼠坐骨神经,通过十二烷基磺酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）进行化学去细胞,并对其保留的细胞外基质成分进行物理、化学评价;在体外,通过培养获得ADSCs和分离所得SVF,并通过流式细胞学分析和多向分化对ADSCs进行评价,同时分别将SVF、ADSCs与背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）共培养,对比观察体外促进轴突生长的效果。在体内,建立大鼠坐骨神经15mm缺损模型,并将SVF和ADSCs分别复合坐骨神经ECM移植物修复大鼠坐骨神经缺损。术后6周对移植物中远段取材并进行免疫荧光染色,观察髓鞘再生情况;术后12周,通过步态分析、坐骨神经功能指数（sciatic functional index,SFI）、腓肠肌肌肉湿重率分析、甲苯胺蓝染色、透射电镜扫描以及Masson染色等方法对比评价桥接材料对大鼠坐骨神经缺损修复效果。[结 果]去细胞坐骨神经移植物具有3D网格状结构,同时保留了大量的胶原成分、层粘连蛋白和纤维连接蛋白成分。ADSCs细胞在体外可诱导分化为脂肪细胞、骨细胞和软骨细胞;同时,SVF和ADSCs在体外可促进轴突生长。坐骨神经ECM移植物复合SVF和ADSCs通过步态分析、坐骨神经功能指数、腓肠肌肌肉湿重率分析、甲苯胺蓝染色、透射电镜扫描以及Masson染色等方法评价结果均优于单纯去细胞神经移植组（对照组）,差异具有统计学意义。[结 论]本实验通过制备坐骨神经ECM移植物并复合SVF和ADSCs在体外评价中可有效促进周围神经细胞生长,体内评价可有效促进大鼠周围神经缺损修复,其治疗效果接近自体神经移植。

方波^[3]（2015）在《种植神经干细胞的组织工程神经桥接物的构建及川芎嗪的保护作用》文中提出第一部分川芎嗪对基因修饰神经干细胞的保护作用目的:构建SD乳鼠神经干细胞体外基因修饰模型,探讨TMP对神经干细胞基因修饰损伤的保护作用及其机制,为TMP作为组织工程神经保护剂,促神经损伤修复剂提供细胞学基础。方法:（1）分离SD乳鼠海马神经干细胞（NSCs）进行原代培养,将二代NSCs行神经巢蛋白（nestin）及诱导分化后的神经丝蛋白（NF-200）与胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组化鉴定。取二代神经干细胞行携带EGFP基因的逆转录病毒转染并更换完全培养基,然后按基因修饰对照组（GM control）、TMP实验组,溶媒对照组（Vehicle control）分组,同时设正常对照组（Normal control）。其中TMP实验组在DMEM/F12培养基中分别加入工作浓度为50、100、200和300μg/ml的TMP,溶媒对照组在DMEM/F12培养基中加入0.1%DMSO作为溶剂对照,正常对照组为未行基因修饰的二代神经干细胞。各组均在常规条件培养箱中培养72h。通过MTT比色法、台盼蓝染色计数及流式细胞仪检测神经干细胞活力和损伤凋亡情况,Western blotting方法检测凋亡相关因子Bax,Bcl-2和Caspase-3的表达。结果:与正常对照组比较,溶媒对照组和基因修饰对照组NSCs活力均显着降低,细胞死亡率及细胞凋亡率均显着增高（P<0.05）,而抑凋亡基因Bcl-2蛋白表达下调,促凋亡基因Bax、Caspase-3蛋白表达上调（P<0.05）;但基因修饰对照组与溶媒对照组组间比较上述指标无明显差异（P>0.05）;与基因修饰对照组比较,TMP实验组呈一定浓度依赖性,能浓度依赖地减少细胞死亡率及凋亡率,增强细胞增殖活性,且TMP可显着上调基因修饰后NSCs中Bcl-2蛋白表达水平,下调Bax、Caspase-3蛋白表达水平,但基因修饰对照组和50、100μg/ml TMP组间无明显统计学差异（P>0.05）,200μg/ml TMP组与300μg/ml TMP组间未见明显统计学差异（P>0.05）。结论:TMP能够浓度依赖性地对基因修饰NSCs发挥保护作用,且该作用与其调控凋亡相关因子Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达,抑制细胞凋亡有关,这可能是TMP对周围神经系统发挥保护作用的又一相关机制。第二部分 种植神经干细胞的神经组织工程神经桥接物的构建目的:构建复合基因修饰神经干细胞与脱细胞异体神经的桥接物并检测其作为桥接物的形态学特性与免疫原性,为移植修复周围神经缺损提供理想的组织工程桥接体。方法:（1）12只成年健康SD雄性大鼠,切取双侧坐骨神经（共24条）,将切取的神经段按下列顺序进行化学处理:①剥除外覆结缔组织,无菌蒸馏水震荡12h。②放入3%TritonX-100中震荡12h后无菌蒸馏水清洗3次。③放入4%脱氧胆酸钠中室温下震荡24h后无菌蒸馏水清洗3次。重复1、3步骤,形成的去细胞神经呈乳白色、半透明样。HE染色、及透射电镜扫描观察化学去细胞神经组织结构。④将化学去细胞神经放入DMEM/F12液中4℃保存备用。（2）取12条脱细胞神经在显微镜下用微量加样器注入10ul基因修饰神经干细胞悬液（1×106/ml）后分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三组,Ⅰ、Ⅱ组各5条,Ⅲ组2条,Ⅰ、Ⅱ两组分别在常规DMEM/F12和有200μg/ml TMP的完全培养基中继续培养,1周后取Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三组各2条切片行HE染色、荧光显微镜与免疫组化染色观察细胞分布与支架结构。（3）另取SD大鼠24只分A、B、C、D4组,每组6只,将保存1周SD大鼠坐骨神经、Ⅰ组组织工程化神经、Ⅱ组组织工程化神经及同种异体SD大鼠坐骨神经分别依次包埋于大鼠皮下,1周后取出各组移植神经行HE染色光镜观察及CD8+和CD4+淋巴细胞侵润情况。结果:脱细胞神经的横切片上可见神经外膜和神经束膜组成的圆形管腔结构,髓鞘及细胞成分基本去除。神经外膜和细胞基底膜均保存较完整。纵切片上可见整齐排列的管道样结构,基本无细胞成分,注射神经干细胞后行纵切片可见神经外膜下和束膜间细胞成份,分布不均。培养1周后两组均有较多增殖与分化神经细胞,基因修饰神经干细胞在去细胞桥神经中生长良好,并且有迁移成行的特性,但Ⅱ组更明显,与Ⅰ组差异有显着性（P<0.05）。皮下包埋后行光镜观察见淋巴细胞浸润依次减少,A、B、C组间均有差异。C、D组间无明显差异。神经内CD4+和CD8+淋巴细胞侵润数A组最多,D组最少,A、B、C组间均有显着差异。C、D组间无明显差异。结论:异体神经化学萃取法可去除神经中的细胞和髓鞘而保留完整的神经基底膜管和纤维支架结构,并且对神经基底膜无明显影响。注射神经干细胞并在含TMP培养基中培养后的组织工程化神经具有正常的三维结构及较低免疫原性,可能会是一种理想的组织工程化人工神经桥接物,作为修复周围神经缺损的桥接物。

池昊天,阳运康^[4]（2014）在《干细胞与脱细胞异体神经支架在周围神经长段缺损中的应用》文中认为背景:将种子细胞植入合适的载体支架可以构建具有生物活性及相应功能的组织工程神经桥接物,干细胞与脱细胞异体神经构成的组织工程移植物正成为周围神经长段缺损研究领域的重要移植材料,并已初步显示出良好的应用前景。目的:综述近年来干细胞与脱细胞异体神经支架在周围神经长段缺损中的应用。方法:第一、二作者应用计算机检索1998年1月至2014年2月PubMed数据库、中国期刊全文数据库有关干细胞与脱细胞异体神经支架在周围神经长段缺损中应用的文章,英文检索词"stem cells,peripheral nerve defect,acellular allogeneic nerves";中文检索词"干细胞,周围神经缺损,脱细胞异体神经"。共检索到1 013篇相关文献,其中97篇文献符合纳入标准。结果与结论:干细胞因组织损伤后释放的各种趋化因子吸引以及其自身趋化作用聚集到损伤部位,分泌大量的营养物质,促进机体损伤神经功能的修复。干细胞可以在周围环境的诱导和内在分化偏向共同作用下分化并代替人体内损伤或死亡的神经细胞。此外,干细胞联合组织工程材料移植,减少胶质瘢痕的形成也是促进周围神经损伤修复的因素。干细胞可以增强神经突触之间的联系,建立新的神经环路。神经干细胞具有分化为其他神经细胞的潜力,但其分化与调控的确切机制尚不明了。对于如何改善微环境,使更多的干细胞分化为神经元与少突胶质细胞并维持细胞活性尚缺乏有效的方法。故有效的抑制移植早期的免疫排斥反应,应成为研究的重点所在。神经移植后如何提高神经再生速度和质量,维持靶器官的组织结构与功能更需要长期的摸索。

阳运康^[5]（2014）在《川芎嗪对组织工程神经修复周围神经缺损作用的实验研究》文中进行了进一步梳理第一部分川芎嗪对基因修饰或缺血缺氧损伤鼠胚神经干细胞的保护作用目的：构建SD乳鼠神经干细胞体外缺血缺氧损伤及基因修饰模型；探讨TMP对神经干细胞基因修饰与缺血缺氧损伤的保护作用，以及TMP促进神经损伤修复，发挥神经保护作用的可能机制，为TMP作为神经干细胞保护剂提供细胞生物学理论依据。方法：（1）分离SD乳鼠海马神经干细胞（NSCs）进行原代培养，将二代NSCs行神经巢蛋白（Nestin）及诱导分化后的神经丝蛋白（NF-200）与胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光鉴定。取二代神经干细胞行携带EGFP基因的逆转录病毒转染并更换完全培养基，然后按TMP实验组、基因修饰对照组（GM control）、溶媒对照组（Vehicle control）分组，同时设正常对照组（Normal control）。其中TMP实验组在DMEM/F12培养基中分别加入工作浓度为50、100、200和300μg/ml的TMP，溶媒对照组在DMEM/F12培养基中加入0.1%DMSO作为溶剂对照，正常对照组为未行基因修饰的二代神经干细胞。各组均在常规条件培养箱中培养72h。通过MTT比色法、锥虫蓝染色计数及流式细胞仪检测神经干细胞活力和损伤凋亡情况，Quantitative real-time PCR和Westernblotting方法检测凋亡相关因子Bax，Bcl-2和Caspase-3的表达。另取二代NSCs分为TMP实验组（TMP group）、缺血缺氧对照组（OGDcontrol）、溶媒对照组（Vehicle control）和正常对照组（Normalcontrol）分别培养6h。其中缺血缺氧对照组、溶媒对照组和TMP实验组均采用OGD（oxygen-glucose-deprivation）法构建体外缺血缺氧损伤模型，溶媒对照组在缺血缺氧造模前即给予0.1%DMSO作为溶剂对照，TMP实验组则在造模前即刻分别加入工作浓度为50、100、200和300μg/ml的TMP，直至造模结束。正常对照组则不作任何处理在常规条件下培养6h。通过MTT比色法、锥虫蓝染色计数及流式细胞仪检测神经干细胞活力和损伤凋亡情况，Quantitative real-time PCR和Western blotting方法检测凋亡相关因子Bax，Bcl-2和Caspase-3的表达。结果：（1）与正常对照组比较，溶媒对照组和基因修饰对照组NSCs活力均显着降低，细胞死亡率及细胞凋亡率均显着增高（均P＜0.05），而抑凋亡基因Bcl-2mRNA和蛋白表达下调，促凋亡基因Bax、Caspase-3mRNA和蛋白表达上调（均P＜0.05）；但基因修饰对照组与溶媒对照组组间比较上述指标无明显差异（均P＞0.05）；与基因修饰对照组比较，TMP实验组呈一定浓度依赖性，能浓度依赖地减少细胞死亡率及凋亡率，增强细胞增殖活性，且TMP可显着上调基因修饰后NSCs中Bcl-2mRNA和蛋白表达水平，下调Bax、Caspase-3mRNA和蛋白表达水平，但基因修饰对照组和50、100μg/mlTMP组间无明显统计学差异（P＞0.05），200μg/mlTMP组与300μg/mlTMP组间未见明显统计学差异（P＞0.05）。（2）与正常对照组比较，溶媒对照组和缺血缺氧对照组NSCs活力均显着降低，细胞死亡率及细胞凋亡率均显着增高（均P＜0.05），而抑凋亡基因Bcl-2mRNA和蛋白表达下调，促凋亡基因Bax、Caspase-3mRNA和蛋白表达上调（均P＜0.05）；但缺血缺氧对照组与溶媒对照组组间比较上述指标无明显差异（均P＞0.05）；与缺血缺氧对照组比较，TMP实验组呈一定浓度依赖性，能浓度依赖地减少细胞死亡率及凋亡率，增强细胞增殖活性，且TMP可显着上调基因修饰后NSCs中Bcl-2mRNA和蛋白表达水平，下调Bax、Caspase-3mRNA和蛋白表达水平，但缺血缺氧对照组和50、100μg/mlTMP组间无明显统计学差异（P＞0.05），200μg/mlTMP组与300μg/mlTMP组间未见明显统计学差异（P＞0.05）。结论：TMP能够浓度依赖性地对基因修饰后或缺血缺氧损伤的NSCs发挥保护作用，且该作用与其调控凋亡相关因子Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达，抑制细胞凋亡有关，这可能是TMP对周围神经系统发挥保护作用的相关机制之一。第二部分含川芎嗪培养液对组织工程化神经桥接物生物学特性的影响目的：化学法萃取Wistar大鼠脱细胞坐骨神经，构建种植基因修饰神经干细胞的组织工程化神经桥接物，探讨含TMP培养基对桥接物生物学特性的影响，为移植修复周围神经缺损提供理想的桥接体。方法：（1）12只成年健康Wistar雄性大鼠，切取双侧坐骨神经（共24条），每条长约2cm，其中20条按下列顺序进行化学处理:剥除外覆结缔组织，无菌蒸馏水清洗3次。放入3%TritonX-100中震荡24h后无菌蒸馏水清洗3次。放入4%脱氧胆酸钠中室温下震荡24h后无菌蒸馏水清洗3次。④重复23步骤，直至形成的去细胞神经呈乳白色、半透明样。HE染色、透射电镜扫描观察化学去细胞神经组织结构。⑤将化学去细胞神经放入DMEM/F12液中4℃保存备用。（2）取12条去细胞神经水化后在显微镜下用微量加样器注入10ul基因修饰神经干细胞悬液（2106/ml）后分I、II、III三组，I、II组各5条，III组2条，其中I、II组分别在常规DMEM/F12完全培养基和添加有200μg/mlTMP的完全培养基中继续培养1周；取I、II、III三组各2条切片行荧光显微镜、HE染色与免疫组化（Nestin、NF-200、GFAP）染色观察细胞分布与支架结构。（3）另取SD大鼠24只分A、B、C、D4组，每组6只，分别将4℃保存1周Wistar大鼠坐骨神经、I组组织工程化神经、II组组织工程化神经及同种异体SD大鼠坐骨神经依次包埋于皮下，7天后取出各组移植神经行HE染色光镜观察及CD4+和CD8+淋巴细胞侵润数量检测。另取SD大鼠24只分A、B、C、D4组，每组6只，分别将4℃保存1周Wistar大鼠坐骨神经、I组组织工程化神经、II组组织工程化神经及同种异体SD大鼠坐骨神经依次包埋于皮下，7天后取出各组移植神经行HE染色光镜观察及CD4+和CD8+淋巴细胞侵润数量检测。结果：去细胞神经的横切片上可见神经外膜和神经束膜形成的圆形结构,其内部为松散的胶原成分髓鞘及细胞成分基本消失。神经外膜和细胞基底膜结构均较完整。纵切片上可见较多整，齐排列的管道样结构，基本无细胞成分。注射神经干细胞后纵切片上可见神经外膜下和束膜间有较多细胞成份，分布不均。培养1周后两组均有较多增殖与分化神经细胞，基因修饰神经干细胞在去细胞桥神经中生长良好，并且有迁移成行的特性，但II组更明显，与I组差异有显着性（P＜0.05）。皮下包埋后光镜下见蓝色淋巴细胞浸润依次减少，A、B、C组间均有显着差异。C、D组间无显着差异。神经内CD4+和CD8+淋巴细胞侵润数A组最多，D组最少，A、B、C组间均有显着差异。C、D组间无显着差异。结论：异体神经化学萃取法可去除神经中的细胞和髓鞘而保留完整的神经基底膜管和纤维支架结构，并且对神经基底膜主要成分-层粘连蛋白无明显影响。种植神经干细胞并在含TMP培养基中培养后制作的组织工程化神经具有较低免疫原性及正常神经的三维结构，可能成为一种理想的组织工程化人工神经，作为修复周围神经缺损的桥接物。第三部分川芎嗪预处理组织工程化神经桥接物修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究目的：研究川芎嗪预处理对组织工程化神经桥接物修复大鼠1.5cm坐骨神经缺损的效果。方法：分别按前述方法制作基因修饰的SD大鼠神经干细胞、脱细胞的Wistar大鼠坐骨神经、种植神经干细胞并在含川芎嗪培养基中共培养1周的组织工程化神经。将55只200-250克成年雌性SD大鼠分为A、B、C、D共4组，A、B、C组各15只，D组10只，实验侧均为右后肢坐骨神经。1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,显露坐骨神经,从梨状肌下缘0.5cm处切除神经1.5cm,分别用4种移植物桥接大鼠1.5cm坐骨神经缺损:含川芎嗪的组织工程化神经组（A组）、脱细胞异体神经组（B组）、异体神经组（C组）、自体神经组（D组）。术后A组术侧小腿三头肌内注射TMP液（16mg/kg/日），其余各组（B、C、D组）注射相同体积0.9%NS，连续注射12周至实验结束。术后2周、12周通过大体观察、神经电生理检测、肌肉湿重称重、荧光显微镜观察、辣根过氧化物酶（HRP）逆行示踪及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果。结果：术后12周大体观察发现A、D组实验侧足趾明显散开，足趾印迹分散，恢复足爪着地行走，右后肢蹬力良好，明显优于B、C组；A组坐骨神经功能指数测定、运动神经传导速度和肌肉湿重恢复均优于B、C组（P<0.05），略差于D组（P>0.05）；荧光显微镜与免疫组化染色检测发现，NSCs能在体内存活、迁移并分化为神经元和胶质细胞，A组优于B、C组；术后12周辣根过氧化物酶（HRP）逆行示踪检测提示A组脊神经节中HRP标记的细胞数较B、C组多（P<0.05），甲苯胺蓝染色发现A组移植段再生神经纤维较多,以有髓神经纤维为主，明显优于B、C组（P<0.05）。结论：种植神经干细胞并在含川芎嗪培养液中培养1周的脱细胞异体神经构成的组织工程化神经桥接物能有效修复大鼠坐骨神经缺损，促进周围神经再生及下肢运动功能的恢复。

马洪斌,张荣明^[6]（2013）在《以化学去细胞法处理同种异体神经与周围静脉伴行修复面神经缺损》文中提出背景:有研究表明化学去细胞法处理的同种异体神经修复面神经缺损可以取得较好的修复效果。目的:在化学去细胞法处理同种异体神经的基础上探索一种修复面神经缺损更有效的修复方式。方法:将新西兰大白兔随机分为2组,实验组制备面神经颊支缺损动物模型,采用经化学去细胞的同种异体腓肠神经进行移植,且与伴行静脉行外膜缝合;对照组在同样位置的远近端分别切断面神经,但不破坏被切断神经与周围组织的正常解剖关系,再切断处行外膜缝合桥接。结果与结论:修复后3个月两组兔均存活,面部表情基本对称,胡须活动正常,神经移植处未见明显瘢痕及神经瘤形成。电镜观察结果显示,实验组与对照组右侧面神经颊支传导速度,移植体远端吻合口附近5.0mm段有髓神经纤维数量,靶肌肉运动终板计数均差异无显着性意义（P>0.05）。结果证实,化学去细胞同种异体神经与周围静脉伴行修复家兔面神经缺损的方法可以达到与自体面神经原位移植相似的修复效果。

连霄飞,王伟^[7]（2010）在《脱细胞同种异体神经移植的研究进展》文中研究表明 目前周围神经缺损的病例越来越常见。周围神经损伤后最佳治疗是自体神经移植,但其存在二次创伤、供区功能障碍、感觉缺失、瘢痕形成和神经瘤性疼痛等缺点。且供体有限,常无法满足较大神经缺损或较广泛神经损伤修复的需要。当前解决神经缺损的研究主要集中在三个方面:一是采用肌桥、静脉管、硅胶管等替代物,但其结果都不如人意。二是应用组织工程的方法构建人工神经;而其尚处于实验阶段,离实际临床应用尚有较大距离。三是同种异体神经移植,

姜炜鹏,左金华^[8]（2010）在《脱细胞神经基质制备方法研究进展》文中认为周围神经损伤的修复是创伤外科难题之一,筛选理想的促进神经再生移植物,是解决这一难题的关键。近年来,采用脱细胞处理的同种异体神经作为移植物用于周围神经缺损修复已能取得促进神经再生的效果,应用前景较好。笔者就脱细胞神经基质制备的发展进程、各种制备方法的优缺点及试剂选择作一综述。

刘新胜,王伟^[9]（2009）在《同种异体神经移植去抗原性的预处理:应用与前景》文中研究表明对于周围神经损伤,自体神经移植是最佳的治疗方法。但自体神经移植会带来供区功能缺失,目前多趋向于异体神经移植。异体神经移植成功的关键是降低神经移植体的抗原性。降低抗原性的方法现在多重于物理和化学法,相对于物理法,经过化学脱细胞方法处理后的异体神经移植效果良好。文章介绍了异体神经的免疫反应和神经移植体的特征,探讨了同种异体神经降低免疫抗原性的预处理方法,经过分析得出:一种或多种方法联合降低异体神经抗原性将是未来的研究课题。

刘建文^[10]（2009）在《含川芎嗪的玻璃化保存液对雪旺细胞凋亡及调控基因表达影响的初步实验研究》文中认为目的:探讨在不同温度下含川芎嗪的玻璃化保存液对大鼠雪旺细胞凋亡及调控基因表达的影响。方法: 24只SD大鼠,切取双侧坐骨神经（共48条）,将其随机分成2组（每组24条）:实验组（含川芎嗪）和对照组（不含川芎嗪）。实验组分为A、B、C、D亚组,对照组分为A′、B′、C′、D′亚组（每亚组6条）,分别在不同的温度下保存3周（A、A′亚组:-4℃保存;B、B′亚组:-20℃保存;C、C′亚组:-80℃保存;D、D′亚组:-196℃保存）。3周后取神经进行检测:①HE染色光镜检查;②免疫组化法检测Bcl-2、Bax;③TUNEL法检测细胞凋亡。结果:除D、D′亚组外,实验组各亚组神经雪旺细胞凋亡数量明显少于对照组相应的各亚组,实验组各亚组Bcl-2的阳性表达率均明显高于对照组相应的各亚组,实验组各亚组Bax阳性表达率均明显低于对照组相应的各亚组,差异均有显着性（P<0.05）;实验组中B亚组雪旺细胞凋亡情况和Bcl-2与Bax的表达情况与C、D亚组接近,比较无显着性差异（P>0.05）。结论:含川芎嗪的玻璃化保存液能够在-20℃条件下,通过调节Bcl-2和Bax的表达而有效抑制雪旺细胞的凋亡。

二、化学去细胞同种异体神经移植物储存方法的初步研究（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、化学去细胞同种异体神经移植物储存方法的初步研究（论文提纲范文）

（1）四种冷冻保护剂玻璃化法保存人指固有神经的实验研究（论文提纲范文）

（2）化学去细胞同种异体神经复合SVF细胞修复周围神经缺损的实验研究（论文提纲范文）

（3）种植神经干细胞的组织工程神经桥接物的构建及川芎嗪的保护作用（论文提纲范文）

（4）干细胞与脱细胞异体神经支架在周围神经长段缺损中的应用（论文提纲范文）

（5）川芎嗪对组织工程神经修复周围神经缺损作用的实验研究（论文提纲范文）

（6）以化学去细胞法处理同种异体神经与周围静脉伴行修复面神经缺损（论文提纲范文）

（8）脱细胞神经基质制备方法研究进展（论文提纲范文）

（10）含川芎嗪的玻璃化保存液对雪旺细胞凋亡及调控基因表达影响的初步实验研究（论文提纲范文）

四、化学去细胞同种异体神经移植物储存方法的初步研究（论文参考文献）

• [1]四种冷冻保护剂玻璃化法保存人指固有神经的实验研究[D]. 戴依娜. 遵义医科大学, 2021(01)
• [2]化学去细胞同种异体神经复合SVF细胞修复周围神经缺损的实验研究[D]. 韩公海. 昆明医科大学, 2019(06)
• [3]种植神经干细胞的组织工程神经桥接物的构建及川芎嗪的保护作用[D]. 方波. 四川医科大学, 2015(01)
• [4]干细胞与脱细胞异体神经支架在周围神经长段缺损中的应用[J]. 池昊天,阳运康. 中国组织工程研究, 2014(21)
• [5]川芎嗪对组织工程神经修复周围神经缺损作用的实验研究[D]. 阳运康. 重庆医科大学, 2014(03)
• [6]以化学去细胞法处理同种异体神经与周围静脉伴行修复面神经缺损[J]. 马洪斌,张荣明. 中国组织工程研究, 2013(18)
• [7]脱细胞同种异体神经移植的研究进展[J]. 连霄飞,王伟. 中国医师进修杂志, 2010(05)
• [8]脱细胞神经基质制备方法研究进展[J]. 姜炜鹏,左金华. 广东牙病防治, 2010(01)
• [9]同种异体神经移植去抗原性的预处理:应用与前景[J]. 刘新胜,王伟. 中国组织工程研究与临床康复, 2009(53)
• [10]含川芎嗪的玻璃化保存液对雪旺细胞凋亡及调控基因表达影响的初步实验研究[D]. 刘建文. 重庆医科大学, 2009(06)

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