中药阳春一号对5/6肾切除大鼠的影响

一、中药阳春一号对5/6肾切除大鼠的作用（论文文献综述）

徐雪君^[1]（2021）在《黄葵四物方颗粒剂的制备与质量研究》文中指出一、文献研究黄葵四物方是用于治疗慢性肾病的中药复方,本章对黄葵四物方处方进行了基础分析,包括处方组成及方解,并对黄葵四物方中各单味药化学成分及其药理作用归纳总结,为后续实验研究提供一定的理论基础;本章节还对当前治疗慢性肾病的中西药物进行汇总分析,为本课题的开展提供背景。二、黄葵四物方提取、纯化工艺研究黄葵四物方包含黄葵、虎杖、姜黄和黄芪四味中药,其在慢性肾病的治疗中均发挥重要的作用。本课题组前期研究已经证实黄葵四物方治疗慢性肾病药效确切,接下来将对其工艺进行优化。（1）当前优化提取工艺的方法有很多种,其中正交设计实验可以从全面实验中挑选出具有代表性的点进行实验,其高效、快速、经济。本章节实验首先对单因素溶媒浓度、溶媒倍数以及提取时间进行考察,根据单因素结果设计正交实验,以黄葵四物方中代表性化学成分金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、杨梅素、槲皮素、虎杖苷、白藜芦醇、大黄素、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、姜黄素为指标性成分,并将指标性成分含量和浸膏得率作为评价指标,确定黄葵四物方最优提取工艺。结果发现:黄葵四物方的最佳提取工艺为采用60%乙醇10倍量回流提取3次,每次提取1.5h。（2）中药复方浸膏得率普遍偏高,若要直接做成制剂,用药剂量较大,给患者服药带来一定的困难,并导致患者依从性不好,因此对浸膏进行纯化显得尤为重要。大孔树脂在纯化中药方面被广泛应用,其可以在减少浸膏得率的同时,富集有效成分,因此接下来将在最佳提取工艺的基础上,分别从大孔树脂型号、上样量、上样液浓度、洗脱剂浓度、洗脱剂体积几个方面进行考察。结果可得:黄葵四物方的最佳纯化工艺是以HP-20型大孔树脂作为纯化树脂,提取药液浓度为1g/mL进行上样,每g树脂上样量为1.5g（干燥提取物）,用80%乙醇进行洗脱,4倍柱体积（BV）洗脱即可。三、黄葵四物方提取物的质量研究黄葵四物方由黄葵、虎杖、黄芪和姜黄四味药组成,不同产地的药材质量不一,中药复方在成型之前必须对原药材质量进行把控,故本章实验将在提取纯化工艺优化的基础上针对黄葵四物方提取物的质量进行研究,对黄葵四物方药材质量进行把控,为后续研究提供基础。本章内容主要建立了黄葵四物方中黄葵、虎杖、姜黄、黄芪四味药材的TLC鉴别方法;建立了黄葵四物方提取物的指纹图谱,并指认化学成分;建立黄葵四物方中化学成分的HPLC含量测定方法,结果显示:（1）根据药典规定,通过TLC对黄葵四物方中各味药材进行定性分析,发现各味药材的供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置均显示相同斑点,但是斑点颜色深浅不一,即不同产地不同批次的药材质量存在一定的差异;（2）接下来通过HPLC建立了复方的指纹图谱,对提取物中的成分进行比对,指认出13个化合物,后续根据指认的化学成分对复方进行了含量测定,发现,复方中大部分成分含量相近,部分成分含量差异较大,如姜黄中的姜黄素、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素,故在对姜黄药材进行选择的时候需要避开成分含量较少的产区,为黄葵四物方的制备挑选最佳药材。四黄葵四物方成型工艺研究本文前期已经对黄葵四物方的提取工艺、纯化工艺进行了优化,并对提取物的质量进行了一系列的研究。在此基础上,本章按照新药研究技术规范要求,对黄葵四物方的成型工艺进行考察。首先是对剂型的选择,由于颗粒剂载药量大,携带方便,患者依从性好等优势,我们选择将黄葵四物方制成颗粒剂。接下来分别从辅料的选择、辅料比、物料比、烘干时间和烘干温度考察其颗粒剂成型工艺,结果显示:黄葵四物方颗粒剂的最优工艺为:物料比即清膏:糊精:淀粉=1:1:1,烘干温度为80℃,烘干时间为60 min。后期对其包装材料进行选择,最终确定以颗粒剂常用的药用复合膜（聚酯/镀铝聚酯/聚乙烯药用复合膜）作为本品的内包装材料。剂型工艺的确定为黄葵四物方后续的质量标准研究提供科学合理的依据。五黄葵四物方颗粒剂的质量研究为控制黄葵四物方颗粒剂的质量,确保其质量稳定性,本章建立了黄葵四物方颗粒质量标准,并对其质量进行了评价。首先建立了 TLC鉴别方法,并采用TLC方法对制剂中黄葵、虎杖、黄芪和姜黄进行鉴别;采用HPLC建立黄葵四物方颗粒的指纹图谱并对制剂中指标性成分的含量进行测定,最终为黄葵四物方颗粒建立了可行有效的质量控制体系。综上所述,通过本研究,我们发现:黄葵四物方颗粒制剂的最佳制备工艺是:称取黄葵、虎杖、姜黄和黄芪四味药材,加入10倍量的60%乙醇回流提取3次,每次提取1.5小时,合并提取液,并将其浓缩至1.0g/mL,制备得到黄葵四物方提取物。然后以HP-20作为纯化树脂,药液浓度为1g/mL进行上样,每g树脂上样1.5g（干燥提取物）,用4BV的80%乙醇进行洗脱,再次将纯化药液浓缩,得到黄葵四物方纯化物。加入糊精、淀粉,按照清膏:糊精:淀粉=1:1:1混匀,制软材,过二号筛制粒,于烘箱80℃,干燥60min,取出放凉后,用一号筛和五号筛整粒,用药用复合膜（聚酯/镀铝聚酯/聚乙烯药用复合膜）包装,灭菌,即得成品。

宋卓悦^[2]（2020）在《叶瓜参酸性多糖的制备、表征及缓解肾间质纤维化作用研究》文中研究说明目的:本课题拟采用性状、显微、分子鉴定相结合的方法对大量涌入中国市场的加拿大海参（叶瓜参Cucumaria frondosa）进行基源鉴定,为样品质量可控奠定基础。以叶瓜参为原料,采用现代提取、分级纯化技术,拟优化制备出叶瓜参酸性多糖（Sulfated polysaccharides from Cucumaria frondosa,CFP）的最佳制备工艺。应用现代分析仪器技术,对CFP的化学组成及结构进行系统表征,阐明其初级结构,为CFP的质量控制提供依据。在上述研究基础上,探讨CFP是否具有缓解肾间质纤维化的作用,并阐明其作用机制。本课题的研究旨在完善叶瓜参的样本信息,保障叶瓜参样品的可控性,控制CFP的质量,提高叶瓜参的经济效益,带动叶瓜参相关产业的发展,推进叶瓜参的资源开发,亦为肾间质纤维化的防治提供新思路。方法:1.叶瓜参的基源鉴定采用性状、显微、分子鉴定相结合的方法对市售加拿大海参进行品种鉴定,验证其是否为叶瓜参,并对其性状及显微进行描述。2.叶瓜参多糖的制备采用超声辅助提取法提取叶瓜参粗多糖,并对工艺条件进行优化。采用DEAE-纤维素-52阴离子交换柱色谱与Sephadex G100凝胶柱色谱联合应用的方法对CFP进行分级纯化,获得离子电性和分子量较均一的纯化多糖。通过测定硫酸基及糖醛酸的含量筛选后续实验应用的叶瓜参酸性多糖（CFP）。3.叶瓜参酸性多糖的化学组成及结构鉴定通过综合采用苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝法、氯化钡-明胶法、硫酸-咔唑法、糖腈乙酸酯衍生物-气相色谱法、分子排阻高效液相色谱法、紫外光谱、红外光谱、甲基化反应、质谱、核磁共振波谱等技术方法对制备的纯化多糖CFP的化学组成及结构进行系统解析。4.叶瓜参酸性多糖缓解肾间质纤维化的作用研究应用肾间质纤维化模型（小鼠单侧尿道阻塞模型,UUO模型）探讨CFP对肾间质纤维化的干预作用。通过测定尿液中尿蛋白的含量、血清中尿素氮和肌酐的含量评价肾功能;应用苏木素-伊红（H&E）、Masson染色法观察肾脏的病理学变化、炎症浸润、计算胶原面积等;通过测定肾组织中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量评估炎症因子的变化;采用免疫组化染色测定肾组织中转化生长因子β1蛋白（TGF-β1）、成纤维细胞生长因子2（FGF2）、肌动蛋白α（α-SMA）、纤连蛋白（Fibronectin）、钙粘附蛋白E（E-cadherin）、Ⅰ型胶原（CollgenⅠ）和Ⅳ型胶原（Collgen Ⅳ）的含量。5.CFP缓解肾间质纤维化的作用机制研究采用体内与体外机制相结合的研究方法,应用PCR、Western Blot等技术测定肾脏组织及HK-2细胞中PI3K/Akt/NF-κB通路相关蛋白的表达情况。成果:1.叶瓜参的基源鉴定性状、显微、分子鉴定结果均表明市售加拿大海参为棘皮动物门,海参纲,枝手目,瓜参科叶瓜参（Cucumaria frondosa）的干燥体,与文献及市场调研结果一致。叶瓜参的腹面和五条内筋均为橙红色或金黄色,此为其性状独有特征。叶瓜参的显微结构中,体壁的骨片为不同大小的穿孔板。2.叶瓜参多糖的制备超声辅助提取法提取叶瓜参粗多糖的最佳工艺条件为:液料比（mL:g）为22:1;提取时间为30min;提取温度为62℃;超声功率为120W。此条件下,叶瓜参粗多糖提取率为11.72±0.09%。经DEAE-纤维素-52阴离子交换柱色谱和Sephadex G100凝胶柱色谱联合应用对叶瓜参多糖进行分级纯化,得到2个离子电性及分子量均较为均一的组分,分别为P-1及P-2。由于P-2中硫酸基及糖醛酸含量更高,因此将其选为后续实验中所应用的叶瓜参酸性多糖（CFP）。3.叶瓜参酸性多糖的化学组成及结构鉴定CFP为酸性多糖,其总糖含量为58.57±0.51%,蛋白质含量为1.20±0.08%,硫酸基含量为21.57±1.09%,糖醛酸含量为5.58±0.16%。CFP的相对粘度为1.16,CFP是由岩藻糖构成的均多糖,相对分子质量为136 kDa。CFP的糖残基主要为:SO3--O-4-α-L-Fucf-（1→、→3）-α-L-Fucf-（1→、→2 SO3-,3）-α-L-Fucf-（1→、→3,4 SO3-）-α-L-Fucf-（1→及→2 SO3-,3,4 SO3-）-α-L-Fucf-(1→。4.叶瓜参酸性多糖缓解肾间质纤维化的作用研究与假手术组相比,UUO模型组的小鼠肾功能指标异常,血肌酐、血尿素氮、尿蛋白均显着增加;H&E染色可观察到大量炎症细胞积聚;炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）的水平剧增,TGF-β1、FGF2、α-SMA、Fibronectin、Collgen Ⅰ、Collgen Ⅳ表达增强。而采用CFP干预后,显着改善了小鼠肾功能质变,炎症因子表达减少,TGF-β1和FGF2表达减少,ECM的合成减少,肾脏的炎症和纤维化均有所改善。同时,CFP抗炎和抗纤维化的作用呈剂量依赖性。5.叶瓜参酸性多糖缓解肾间质纤维化的作用机制在UUO模型中,CFP能抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路相关蛋白及下游炎症因子与促纤维化因子的表达。在TGF-β1诱导HK-2细胞纤维化模型上,CFP能够显着抑制TGF-β1引起的PI3K/AKT/NF-κB通路相关蛋白及磷酸化蛋白的高表达,使用PI3K的抑制剂3-MA进行干预,其与CFP联合使用对PI3K/AKT/NF-κB的抑制有增效作用。结论:本文以市售加拿大海参为研究对象,应用性状、显微、分子鉴定的方法验证其基源为叶瓜参（Cucumaria frondosa）,三种方法均可作为后续研究中鉴定叶瓜参基源的方法。采用单因素及响应面优化的方法对超声辅助提取法进行优化,提取率显着由于传统热水提取法;采用DEAE-纤维素-52和Sephadex G100柱色谱联合应用可获得离子电性和分子量均较为均一的2个纯化组分。通过化学分析、UV-Vis、FTIR、GC、甲基化-GC-MS、NMR等技术初步鉴定出CFP的一级结构。通过建立UUO模型发现CFP具有缓解肾间质纤维化的作用效果,通过体内、体外机制研究验证了CFP能够通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路的转导来缓解肾间质纤维化。本研究也为叶瓜参样品的可控性奠定基础,为叶瓜参多糖的制备及质量控制提供了理论基础,为叶瓜参资源综合开发应用提供实践基础,为肾间质纤维化的防治提供新思路。

陈文浩^[3]（2019）在《健脾清化法对缺血再灌注大鼠肾损伤的干预作用及机制研究》文中指出目的:（1）健脾清化方立方理论研究（2）观察健脾清化方改善肾缺血再灌注损伤模型大鼠的肾功能及病理改变。（3）从改善氧化应激损伤及炎性反应角度研究并寻找健脾清化方对肾缺血再灌注损伤的预防效果。为临床防治提供理论基础。方法:（1）理论研究:通过对传统医学中关于肾脏病的认识和理论研究找寻并整理健脾清化方的理论基础。（2）实验研究:建立双侧肾动脉结扎诱导的肾缺血再灌注损伤大鼠模型,分别在造模前给予生理盐水、健脾清化方、盐酸罗格列酮预防性用药1周,造模后分别于造模后1h,造模后6h,造模后24h分批测定各组的肾功能、血清SOD、NO、NOS、羟自由基抑制能力,ELISA法测定血清IL-1β、IL-10、TNF-α,Western blot法测定肾组织NF-κB表达水平,肾脏组织进行HE染色,观察各组大鼠的肾脏病理改变。结果:（1）理论研究:脾虚湿热是急性肾IRI在传统医学理论中的重要因素,健脾清化法是预防急性肾IRI的有效办法。（2）实验研究:与正常组相比,三组模型组的BUN、Scr均明显升高（P<0.05）,缺血再灌注1h的盐酸罗格列酮组与健脾清化方组BUN、Scr均较模型组水平低,健脾清化方组Scr水平更低（P<0.05）。缺血再灌注6h的盐酸罗格列酮组与健脾清化方组BUN、Scr均较模型组明显降低（P<0.05）。缺血再灌注24h的盐酸罗格列酮组与健脾清化方组BUN、Scr均较模型组显着降低（P<0.05）。三组健脾清化方均优于盐酸罗格列酮。健脾清化方可有效改善肾组织病理变化,与盐酸罗格列酮组间无明显差异。结论:（1）经大鼠背侧双肾夹闭肾动脉方式进行急性肾IRI造模方式易于操作和成功。且急性肾IRI在再灌注24h内持续存在并加重。（2）预防性使用健脾清化方能明显改善急性肾IRI大鼠的肾功能水平,保护肾脏功能,减少急性肾IRI引起的肾功能损伤。（3）预防性使用健脾清化方能明显减少急性肾IRI大鼠的肾脏损伤,能有效改善肾小管损伤等病理损害。（4）健脾清化方保护急性肾IRI的机制可能与增强对ROS的清除能力,同时抑制了炎性因子NK-κB、IL-1β、TNF-α等释放表达有关。（5）急性肾IRI的病理机制可能与NF-κB/TNF-α/IL-1β信号通路有关,健脾清化方可有效抑制这一通路,保护肾功能。（6）急性肾IRI可能存在湿热状态,健脾清化方可能通过清热化湿有效保护肾脏功能。

沈金峰,黄伟,谢娟,晏子友^[4]（2017）在《中药复方抗肾纤维化的动物实验研究概况》文中进行了进一步梳理目的:通过检索中药复方防治肾纤维化实验研究方面的文献,进一步了解中医药在肾纤维化防治方面的动物实验研究概况。方法:通过中国知网界面检索项"文献标题"中检索"肾纤维化",时限为2015-2017年,将检索到的文献进行筛选,并归类总结。结果:调研发现,共有实验研究类文献269篇,其中主要复方有18个。结论:中药复方在防治肾纤维化的实验研究方面已深入到分子水平,但这些实验尚缺乏深入系统的概述。

连晓江^[5]（2017）在《益肾活血方对腺嘌呤诱发肾衰大鼠的实验研究》文中认为本研究采用灌胃高浓度腺嘌呤导致的慢性肾衰竭（CKD）大鼠模型,通过观察益肾活血方高、常规剂量、氯沙坦对于腺嘌呤CKD大鼠的症状、肾重与体重之比、血肌酐、尿素氮、血清胱抑素C等实验室指标及病理组织,研究该方对腺嘌呤CKD大鼠的防治作用。目的:观察益肾活血方对腺嘌呤肾衰竭大鼠肾功能的防治作用,为进一步的临床应用提供实验数据支持。方法:（1）实验动物:SPF级健康雄性大鼠45只。（2）模型制作:大鼠体重（150±20）g,饲养于河南省中医院清洁级动物实验室,45只大鼠实验前均于实验室适应饲养1周,随机选取8只组成正常组,余均为模型组,模型组为造模组,大鼠CKD造模方法均采用间断隔日灌胃腺嘌呤法,正常组大鼠则采用生理盐水进行灌胃。实验造模时间为28 d,第29天在造模组中随机选取5只大鼠采血后处死,化验肌酐值,并制作大鼠肾脏病理切片,大鼠血肌酐水平均高于正常值高限9.7mmol/L,肾组织切片光镜下均显示肾小球硬化、肾间质纤维化,表示慢性肾衰模型制备成功。（3）药物干预及分组:将造模组剩余大鼠按照体重分层随机分为4组,分别为益肾活血方高剂量组、益肾活血方常规剂量组、西药（氯沙坦）组和模型组,每日下午约16时左右所有大鼠均灌胃给药1次,药物干预时间共计8周。益肾活血方高剂量组、常规剂量组、氯沙坦组分别予益肾活血方中药49.97g/kg/d、12.49 g/kg/d、9 mg/kg/d,造模组和正常组大鼠予生理盐水10 m L/kg。给药8周后所有大鼠禁食约24 h,收集血液、组织标本,进行检测分析。结果:与正常组大鼠相比,其余各组大鼠血清肌酐、尿素、血清胱抑素C值均明显下降（P<0.01）;益肾活血方高剂量组大鼠血清肌酐、尿素、血清胱抑素C值、肾脏系数（大鼠左肾重量与自身重量之比）、较模型组下降明显（P<0.01）,药物干预三组相互之间比较,益肾活血方高剂量效果最优（P<0.05）;大鼠肾脏病理切片光镜下显示:益肾活血方高剂量组大鼠肾小球纤维化最轻,炎症细胞侵润相对较少。结论:益肾活血方对腺嘌呤CKD大鼠肾功能有明显改善作用。

杜治锋^[6]（2012）在《救肾合剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化作用机制的实验研究》文中进行了进一步梳理目的：通过观察中药救肾合剂对UUO模型大鼠体重、肾重/体重、血清Scr、BUN、NAG水平、肾脏病理及肾组织TGF-β1、CTGF、Col Ⅰ、ColⅢ、 FN蛋白表达及TGF-β1mRNA、CTGFmRNA基因表达的影响,探讨该合剂干预肾间质纤维化的可能作用机制。方法：将健康SPF级SD大鼠随机分为7组,即空白对照组、假手术组、模型组、贝那普利对照组及救肾合剂小、中、大剂量组,每组10-11只,适应性喂养1周后采用大鼠单侧输尿管结扎方法复制UUO肾间质纤维化动物模型,然后给药干预3周,检测体重、肾重/体重、血清Scδ、BUN、 NAG、肾脏病理等指标,并取实验大鼠肾组织,检测其TGF-β1、CTGF、 ColⅠ、ColⅢ、FN蛋白表达及TGF-β1mRNA、CTGFmRNA基因表达的水平。结果：救肾合剂各剂量组与模型组相比,体重明显升高（P<0.05）,其中救肾合剂小剂量组体重在第3周时较贝那普利组明显升高（P<0.05）。救肾合剂各剂量治疗组肾重/体重比不同程度降低,其中以救肾合剂小、中剂量最为显着（P<0.01）；救肾合剂中剂量组较贝那普利组降低明显（P<0.05）。组织病理学结果显示救肾合剂各剂量组与模型组相比肾小管上皮细胞变性、间质炎性细胞浸润、系膜细胞增生、肾间质纤维物质增生均明显减轻。肾组织免疫组化检测提示,救肾合剂治疗组肾小管上皮细胞、肾小球固有细胞中的TGF-β1、CTGF、ColⅠ、ColⅢ、FN表达与模型组相比明显减少,且以大、中剂量组为显着,显示一定量效依赖关系。肾组织RT-PCR检测提示,救肾合剂各治疗组TGF-β、mRNA、CTGFmRNA表达量较模型组显着减少（P<0.01）,其中救肾合剂治大、中剂量组比小剂量组表达量显着减少（P<0.01）,呈剂量依赖关系；抑制TGF-β1mRNA表达与贝那普利治疗组相比,救肾合剂大剂量组作用显着（P<0.01）；抑制CTGFmRNA表达与贝那普利治疗组相比,救肾合剂中、大剂量组作用显着（P<0.01）。结论：救肾合剂具有一定的保护肾功能与抑制肾间质纤维化作用,其内在机制可能与抑制TGF-β1mRNA.CTGFmRNA,减少肾组织TGF-β1、CTGF细胞因子表达,进而抑制Col Ⅰ、ColⅢ、FN的产生与堆积有关。

王圣治^[7]（2012）在《益气解毒化瘀法抗肾小球硬化实验研究》文中研究说明肾小球硬化是慢性肾衰的主要病理基础，也是各种肾小球疾病进行性进展的最终结局，临床上表现为慢性肾功能衰竭。其主要病理特征为系膜细胞（MC）增殖和细胞外基质（ECM）的过度积聚。目前西医在肾小球硬化的发病机理方面做了许多深入的研究工作，但是对于在肾小球硬化的治疗，保护肾脏，控制慢性肾功能衰竭的进展方面的研究，报道较少，最近几年，中药的复方、单味草药及中药提取物在治疗肾小球硬化，保护肾脏，延缓肾功能衰竭进展，取得了许多新进展，因此对于中药治疗肾小球硬化，保护肾脏，值得深入研究。本实验是在前期课题“愈肾颗粒拆方重组对大鼠肾小球系膜细胞的影响研究”的基础上开展的，前期课题研究，按照中医病机和组方原则为依据进行拆方，将原处方按益气化瘀解毒、益气化瘀、益气解毒的组方原则，经试验研究，初步结论复方1号组黄芪，丹参，白花蛇舌草组更具有显着抑制肾小球系膜细胞增殖，降低细胞外基质合成，防治肾小球硬化的功效。本实验即针对该益气解毒化瘀小复方（黄芪，丹参，白花蛇舌草），开展进一步研究，观察益气解毒化瘀小复方及其单味药组干预肾小球硬化的作用及作用机制，并探讨益气解毒化瘀同治对提高防治肾小球硬化的理论意义和实用价值，为在临床方面防治肾小球硬化，提供理论与方法依据，为下一步的深入科学研究中药防治肾小球硬化打下基础。实验一：益气解毒化瘀小复方及其单味药对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡影响的研究目的：探讨益气解毒化瘀小复方及其单味药对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖，凋亡的影响。材料与方法：1.主要材料：Wistar大鼠60只，体重（200±20）g；大鼠肾小球系膜细胞；中药材：小复方由黄芪，丹参、白花蛇舌草组成，单味药组分别为黄芪，丹参，白花蛇舌草。西药对照组：替米沙坦；DMEM培养基干粉、标准胎牛血清、血管紧张素Ⅱ、MTT、AnnexinV-FITC、台盼蓝；2.主要仪器：超净工作台；CO2恒温培养箱；倒置荧光显微镜；Benehmark酶标仪；电子精密天平；超声波细胞粉碎机；流式细胞仪；蛋白核酸分析仪；电泳仪；凝胶图像分析系统；高速冷冻离心机；电热恒温鼓风干燥箱；电动玻璃匀浆机；细胞培养瓶；细胞培养板（96孔、12孔）、离心管、微孔滤器；3．含药大鼠血清的制备：将各组中药饮片分别放入冷水中浸泡大约30分钟，先用武火将中药煎沸腾，再用文火保持沸腾30分钟，然后将各组药液滤出来，再加水煎煮，煮沸后文火保持大约20分钟，每一剂煎煮三次之后混合一起，煎煮浓缩至所需剂量的浓度。将中药黄芪水煎并浓缩至0.7g/ml，丹参水煎并浓缩0.25g/ml，白花蛇舌草水煎并浓缩至0.3g/ml，复方组水煎并浓缩至1.25g/ml，替米沙坦加入蒸馏水配成浓度为0.6mg/ml。将60只Wistar大鼠按照随机分组的原则分为6组，分为：复方组（丹参、黄芪、白花蛇舌草），正常对照组黄芪组，丹参组，白花蛇舌草组，对照西药替米沙坦组。正常组每日灌服蒸馏水4ml，分早晚两次，中药组分别每日灌服药液4ml，分早晚两次，西药替米沙坦组每日灌服药液4ml，分早晚两次灌药，连续三日，在第三天灌胃后1小时采取腹主动脉采血，采血后离心取得血清（1500rpm离心5分钟），在56℃水浴，时间为30min，灭活补体后，用0.22μm无菌滤器进行过滤，之后放入-20℃冰箱中冻存备用4.系膜细胞的培养：每天要观察大鼠肾小球生长状态，放到倒置显微镜下观察，细胞生长状态比较好的表现为，细胞呈现为梭型，并且在细胞中间可见到一清晰卵圆形细胞核，细胞紧贴在细胞培养瓶上。一般2-3天换液一次，换液时候弃去培养液的总量的1/2-1/3，然后加入新的培养液，新加入的培养液能够覆盖在培养瓶底就可以，换完培养液后，旋紧培养瓶盖并松半扣，放入5%CO2孵箱中，37℃中进行培养。5.随机分组系膜细胞：血管紧张素Ⅱ组：加入浓度为10-6mol/L的AngⅡ和浓度为10%胎牛血清的DMEM液；正常血清组：加入10%浓度未给予药物的正常大鼠血清的DMEM液和10-6mol/L的AngⅡ中药小复方组：加入浓度为10-6mol/L的AngⅡ和浓度为10%的中药小复方组大鼠血清。黄芪组：加入浓度为10-6mol/L的AngⅡ和浓度为10%的黄芪组大鼠血清丹参组：加入浓度为10-6mol/L的AngⅡ和浓度为10%的丹参组大鼠血清白花蛇舌草组：加入浓度为10-6mol/L的AngⅡ和浓度为10%的白花蛇舌草组大鼠血清西药对照替米沙坦组：加入浓度为10-6mol/L的AngⅡ和浓度为10%的替米沙坦中药组大鼠血清6.系膜细胞增殖与凋亡的检测：采用MTT比色法，用酶联免疫检测仪测吸光度值A（570nm处），将生长状态良好的大鼠肾小球系膜细胞调整细胞浓度为1×104/ml，转种于96孔板每孔200μl，每组随机设6个复孔，培养24h待细胞贴壁后，换成无血清DMEM培养液培养24h，使多数细胞同步于G0/G1期，然后分别加入含10%正常大鼠血清和10%含药血清的，每孔200μl，继续培养48小时后，弃去培养液，分别于培养结束前6小时加入MTT20μl/孔。培养结束后，移去MTT溶液，然后每孔加入150μl二甲亚砜（DMSO），于37oC微孔振荡器振荡10分钟，待结晶后完全溶解后，用酶联免疫检测仪测吸光度值A（570nm处）。流式细胞仪测定含药血清对肾小球系膜细胞增殖的抑制及凋亡作用。结果：与正常对照组比较，AngⅡ组有极显着性差异（P<0.01），提示血管紧张素Ⅱ组（AngⅡ）能促进肾小球系膜细胞异常增殖，系膜细胞增殖模型建立成功。各药物组明显降低系膜细胞增殖情况，与AngⅡ组对比有显着性差异（P<0.01），说明各药物干预组对AngⅡ刺激的系膜细胞增殖均有抑制作用；复方组降低系膜细胞增殖最为明显，与各单味药，西药对照组比较，有显着性差异（P<0.01或P<0.05），提示复方组抑制肾小球系膜细胞增殖作用最强；其余各组之间比较无显着性差异。药物血清在作用24、48小时之间无显着性差异，提示药物抑制大鼠肾小球系膜细胞增殖作用不随时间的延长而又显着性变化。流式细胞仪检测结果显示：与正常对照组，血管紧张素组相比，各治疗组凋亡率显着增加（P<0.05），并且复方组抑制肾小球系膜细胞凋亡作用最强，与单味药及西药组比较有显着差异（P<0.05），其余各药物组之间比较没有显着性差异（P>0.05）。结论：益气解毒化瘀小复方可有效地抑制肾小球系膜细胞增殖，有效地促进系膜细胞凋亡，并优于单味药，从而达到抗肾小球硬化，保护肾脏的目的。实验二：益气解毒化瘀小复方及其单味药对大鼠肾小球系膜细胞FN，Col-IV胶原蛋白影响的研究目的：探讨益气解毒化瘀小复方及其单味药对大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质FN，Col-IV胶原蛋白的影响。材料与方法：主要材料：血清IV型胶原酶联免疫测定试剂盒、血清纤维连接蛋白（FN）酶联免疫测定试剂盒、Col-IV型胶原酶。主要方法：采用双抗体ELISA夹心法对系膜细胞上清进行测定，取培养液100ul，按血清按照血清FN、Col-IV酶联免疫试剂操作说明书进行检测，结果为酶标仪测定的OD值，减去正常对照组的OD值结果：血管紧张素组可明显增高FN，Col-IV胶原蛋白水平，与空白对照组比较有极显着性差异（P<0.01），说明血管紧张素能够促进ECM合成增加，加速肾小球硬化形成；与血管紧张素组对比，替米沙坦组，丹参组，黄芪组，白花蛇舌草组，复方组均有显着性差异（P<0.05），说明上述中药能明显降低FN，Col-IV胶原蛋白水平，抑制ECM合成，防止肾小球硬化；各组降低FN，Col-IV胶原蛋白水平比较，复方组最为明显，与替米沙坦组，黄芪组，丹参组，白花蛇舌草组比较有显着性差异（P<0.05），以上结果显示复方组能够下调FN，Col-IV胶原蛋白水平，降低细胞外基质的沉积，延缓肾小球硬化的进展，并且优越于各单味药组。结论：益气解毒化瘀小复方可有效减少FN，Col-IV胶原蛋白含量，降低系膜细胞外基质（ECM）合成，并优于单味药，达到防治肾小球硬化的目的。实验三：益气解毒化瘀小复方及其单味药对大鼠肾小球系膜细胞MMP3，TIMP1影响研究目的：探讨益气解毒化瘀小复方及其单味药对大鼠肾小球系膜细胞MMP3，TIMP1的基因表达影响，初步明确其抗肾小球硬化的作用机理。材料与方法：主要材料与仪器：Trizol、异丙醇、氯仿、DNA-MARKER、RT-PCR试剂盒、MMP-3，TIMP-1。超低温冰箱；超纯水机；电动玻璃匀浆机；超声波细胞粉碎机；蛋白核酸分析仪低温高速离心机；低温冰箱；洁净工作台；快速混匀器；PCR仪；电泳仪；电泳槽；微波炉仪固液相分子杂交仪。方法：RT-PCR法检测各组含药血清对大鼠肾小球系膜细胞MMP3，TIMP1mRNA的表达影响。结果：各药物组对大鼠肾小球系膜细胞MMP3mRNA，TIMP1mRNA表达影响的研究：各组肾小球系膜细胞MMP-3mRNA，TIMP1mRNA明显不均一。各治疗组组均能不同程度地促进MMP3mRNA的表达，降低TIMP1mRNA的表达，而以中药复方最为显着，说明中药复方降低ECM合成，抗肾小球硬化作用与促进MMP3mRNA的表达，降低TIMP1mRNA表达有关。结论：益气解毒化瘀小复方抑制系膜细胞增殖，降低细胞外基质合成，与降低MMP3mRNA的表达，促进TIMP1mRNA表达有关。实验四：益气解毒化瘀小复方及其单味药对大鼠肾小球系膜细胞Smad3，Smad7mRNA的影响研究目的：探讨益气解毒化瘀小复方及其单味药对大鼠肾小球系膜细胞信号通路Smad3，Smad7mRNA的基因表达影响，初步明确其抗肾小球硬化的作用机理。材料与方法：Smad3，Smad7试剂。RT-PCR法检测各组含药血清对大鼠肾小球系膜细胞细胞内信号传递Smad3/7检测：分子Smad3/7mRNA的表达影响结果：各药物组对大鼠肾小球系膜细胞细胞内信号通路Smad3/Smad7mRNA表达影响：采取益气解毒化瘀小复方及个单味药干预后，可以明显抑制Smad3的表达，促进Smad7的表达，并且益气解毒化瘀复方优越于各单味药组。所以益气解毒化瘀小复方中药可以抑制大鼠肾小球系膜细胞TGF-β/smad信号通路的过程，从而延缓肾小球硬化。这一结论从基因水平阐述了益气解毒化瘀小复方抑制肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质（ECM）积聚，保护肾脏的作用机理。结论：益气解毒化瘀小复方中药可以抑制大鼠肾小球系膜细胞TGF-β/smad信号通路的过程，从而延缓肾小球硬化。从基因和蛋白水平阐述了益气解毒化瘀小复方抑制肾小球系膜细胞增殖及抑制ECM积聚，保护肾脏的作用机理

吕波^[8]（2008）在《肾衰泻浊丸延缓慢性肾衰竭模型大鼠肾间质纤维化的实验研究》文中研究指明目的:观察肾衰泻浊丸治疗慢性肾衰模型大鼠药效,探讨其作用机理。方法:采用腺嘌呤灌胃建立慢性肾衰大鼠模型。将肾衰泻浊丸治疗组分低、中、高三个剂量组,设立尿毒清为阳性对照组,同时对空白组,模型组予以等量蒸馏水,观察血肌酐,尿素氮的变化情况。运用免疫组化法观察肾组织FN、TGF–β1在肾小管间质的表达。结果:肾衰泻浊丸能降低血肌酐、尿素氮含量;肾衰泻浊丸可明显下调FN、TGF-β1在肾小管、间质的表达,与对照组相比有显着性差异（p<0.05）;肾衰泻浊丸能够改善肾小管、间质的病理损伤状况。结论:肾衰泻浊丸可以降低腺嘌呤致肾衰大鼠降低血Scr、BUN改善肾功能。肾衰泻浊丸可减少肾组织中FN、TGF-β1的表达水平,减轻肾小管、间质的炎症反应,抑制肾间质纤维化的发生。

孟瑶^[9]（2007）在《通络保肾复方对5/6大鼠肾切除模型肾脏保护作用机理研究》文中研究指明目的本文采用5/6肾切除慢性肾功能衰竭大鼠为模型,探讨临床实践方通络保肾复方延缓肾纤维化的作用机理,以及“肾络瘀痹”的病因病机、病理基础,以期为中西医结合防治肾纤维化提供科学的实验依据和理论基础。方法1.纯系雄性Wistar大鼠40只,体重180-220g。适应性喂养1周,随机分成正常组、模型组、代文组、保肾康组、中药组五组（通络保肾复方组）,每组8只。除正常组外其余四组行5/6肾切除术。模型组大鼠予生理盐水灌胃,保肾康组、代文组、中药组分别给予保肾康、代文、通络保肾复方灌胃。期间第四周和第六周测大鼠体重、12小时尿蛋白。术后第6周取材,分离血清,测定其中BUN、Cr、CHO、TG、LDL的含量,并做HE染色、过碘酸希夫染色观察肾组织病理形态学变化。2.采用免疫组化法,检测5/6肾切除大鼠肾组织中Fn、Ln,胶原Ⅰ、Ⅲ的含量,原位杂交的方法,检测5/6肾切除大鼠肾组织中VEGFmRNA的表达。3.采用SPSS13.0软件对相关实验数据进行统计学处理,行方差分析,计量资料均数用x±s表示。结果通过以上实验可以得到以下结果:1.通络保肾复方可以减少5/6肾切除大鼠尿蛋白的丢失,降低血肌酐和尿素氮,改善肾功能,改善肾组织的病理损伤,能够保护残存肾单位,延缓肾纤维化的进展。2.通络保肾复方能降低大鼠残肾组织Fn、Ln、胶原Ⅰ、Ⅲ的含量从而减轻ECM的过度积聚,延缓肾纤维化的进程。3.通络保肾复方能上调大鼠残肾组织中VEGFmRNA的表达,可能是其延缓肾纤维化的进程机制之一。结论通过统计学分析及各指标之间的关系进行深入探讨,研究结论如下:1.完善“肾络瘀痹”理论,提出中医病因病机分三个阶段:外邪入络、毒侵肾络和络毒蕴结;以肾纤维化的病理模型为载体探讨肾络瘀痹的理论基础和治疗方法。提出细胞外基质的过度积聚,体现了“久病入络,络毒蕴结”。络毒蕴结是ECM过度聚积的直接结果。2.以“肾络瘀痹”为指导化裁的临床实践方通络保肾复方通过阻断多个病理环节,延缓肾纤维化的进程,对于慢性肾脏疾病的早期肾脏损伤疗效良好。

刘碧崇,杨磊林,周翠莲,时丹^[10]（2004）在《中药阳春一号对5/6肾切除大鼠的作用》文中认为用 5 /6肾切除模型研究阳春一号对 5 /6肾切除大鼠的影响 ,12 0只动物采用经典的 5 /6肾切除方法制作慢性肾功衰模型。阳春一号可使大鼠存活率显着提高 ,2 4小时尿量、2 4小时尿肌酐、血清尿素氮呈显着降低 ,表明阳春一号有一定程度的治疗作用。

二、中药阳春一号对5/6肾切除大鼠的作用（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、中药阳春一号对5/6肾切除大鼠的作用（论文提纲范文）

（1）黄葵四物方颗粒剂的制备与质量研究（论文提纲范文）

（2）叶瓜参酸性多糖的制备、表征及缓解肾间质纤维化作用研究（论文提纲范文）

（3）健脾清化法对缺血再灌注大鼠肾损伤的干预作用及机制研究（论文提纲范文）

（5）益肾活血方对腺嘌呤诱发肾衰大鼠的实验研究（论文提纲范文）

（6）救肾合剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化作用机制的实验研究（论文提纲范文）

（7）益气解毒化瘀法抗肾小球硬化实验研究（论文提纲范文）

（8）肾衰泻浊丸延缓慢性肾衰竭模型大鼠肾间质纤维化的实验研究（论文提纲范文）

（9）通络保肾复方对5/6大鼠肾切除模型肾脏保护作用机理研究（论文提纲范文）

（10）中药阳春一号对5/6肾切除大鼠的作用（论文提纲范文）

四、中药阳春一号对5/6肾切除大鼠的作用（论文参考文献）

• [1]黄葵四物方颗粒剂的制备与质量研究[D]. 徐雪君. 南京中医药大学, 2021(01)
• [2]叶瓜参酸性多糖的制备、表征及缓解肾间质纤维化作用研究[D]. 宋卓悦. 广州中医药大学, 2020(06)
• [3]健脾清化法对缺血再灌注大鼠肾损伤的干预作用及机制研究[D]. 陈文浩. 上海中医药大学, 2019(03)
• [4]中药复方抗肾纤维化的动物实验研究概况[J]. 沈金峰,黄伟,谢娟,晏子友. 中医临床研究, 2017(26)
• [5]益肾活血方对腺嘌呤诱发肾衰大鼠的实验研究[D]. 连晓江. 河南中医药大学, 2017(06)
• [6]救肾合剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化作用机制的实验研究[D]. 杜治锋. 湖南中医药大学, 2012(10)
• [7]益气解毒化瘀法抗肾小球硬化实验研究[D]. 王圣治. 辽宁中医药大学, 2012(06)
• [8]肾衰泻浊丸延缓慢性肾衰竭模型大鼠肾间质纤维化的实验研究[D]. 吕波. 黑龙江省中医研究院, 2008(11)
• [9]通络保肾复方对5/6大鼠肾切除模型肾脏保护作用机理研究[D]. 孟瑶. 北京中医药大学, 2007(02)
• [10]中药阳春一号对5/6肾切除大鼠的作用[J]. 刘碧崇,杨磊林,周翠莲,时丹. 中药药理与临床, 2004(06)

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