一、胶原最佳冻干浓度的选择（论文文献综述）
冯玲玲[1]（2021）在《海蜇胶原抗氧化肽的制备分离、结构解析及活性研究》文中研究指明海蜇是一类食源性生物,含有丰富的胶原蛋白,其可经水解形成能直接被人体肠道所吸收的肽,具有较强的抗氧化作用。本文首先对海蜇胶原蛋白进行提取及结构特性研究,其次对胶原抗氧化肽进行制备、结构特性、分离鉴定以及抗氧化活性研究,旨在为寻找天然抗氧化剂提供实验数据支撑。具体研究内容及实验结果如下:（1）利用盐酸-胃蛋白酶法可成功从海蜇中提取到高纯度Ⅰ型胶原蛋白,其亚基结构为[α1（Ⅰ）]3。海蜇胶原蛋白中含有15.94%的亚氨基酸,且甘氨酸含量最高（25.99%）,不含半胱氨酸和色氨酸。热收缩温度为43.79℃,热稳定性较好。海蜇胶原蛋白分子排布紧凑,具有较完整的三螺旋结构,且微观呈多层聚集、以纤维为主的无规则网状结构。（2）海蜇胶原抗氧化肽酶解工艺优化试验结果表明,胰蛋白酶为最适用酶,酶解条件为温度41.0℃、时间5.9 h、pH 7.9、酶添加量8.5 u/mg。该条件下,海蜇胶原抗氧化肽的活性与其质量浓度呈正相关,Fe3+还原力最大吸光度为0.4125,DPPHs·、·OH、ABTS+·自由基的IC50值分别为32.28、3.12、0.74 mg/mL。结构特性研究结果表明,海蜇胶原抗氧化肽主要为1000 Da以下的肽段,其芳香族氨基酸、疏水性氨基酸以及必需氨基酸含量均明显高于酶解前的胶原蛋白。酶解作用使胶原蛋白原有的三股螺旋结构遭到破坏,分子结晶度下降,有序程度减弱,微观呈不规则的碎片状结构。（3）利用超滤、Sephadex G-15 凝胶色谱、Nano-LC-ESI-Q-Orbitrap-MS/MS 和Denovo技术从海蜇胶原抗氧化肽中分离鉴定并筛选得到10条氨基酸序列符合抗氧化肽特征的肽段,分别为 YLGPK、YGLPNLK、YAPFD、AYPNM、FPLP、PNLGAPGS、VGDLGPR、VPLP、LVVHYP、LVGDLGPR。（4）对10条肽段进行抗氧化活性测定与比较。化学抗氧化实验表明,YAPFD具有最大的DPPH·和·OH自由基清除率,LVVHYP具有最大的ABTS+.自由基清除率和Fe3+还原力,不同氨基酸序列的肽段间既存在着协同作用也存在拮抗作用。HepG2细胞抗氧化实验表明,AYPNM对ABAP诱导的脂质自由基具有最强的清除力,LVGDLGPR则对H2O2诱导的ROS具有最强的清除力。
杨青[2]（2021）在《真空低温即食海参冻干片工艺研究》文中进行了进一步梳理海参是一种名贵的海洋珍品,因其含有多种药理活性成分和营养物质而深受人们喜爱,古往今来海参被广泛应用于疾病康复和滋补养生。随着人们生活水平的不断提高,以及市场对海参产品需求的逐步扩大,推动着海参养殖、加工产业的发展。目前,市场上海参产品主要是以淡干海参、盐渍海参为主,海参加工方式也以传统蒸煮方式为主,需要经过长时间的泡发后再反复蒸煮,不仅影响海参的口感品质,而且造成了营养成分的大量流失。针对目前新型即食海参产品和相关加工技术的研究以及应用相对较少的问题。本论文以盐渍海参为原料,采用超声波辅助复水技术、真空低温加工技术和真空冷冻干燥技术,探讨了海参前处理技术以及新型即食海参加工技术对海参的质构、营养成分以及风味物质的影响和相互关系,为即食海参加工技术和产品质量的提升提供了理论依据。主要研究内容和结果如下:1、利用壳聚糖/超声波辅助复水的前处理方法,比传统水发,探索了在不同壳聚糖浓度、超声温度、超声频率、超声时间和复水时间盐渍海参复水的影响,优化和确立了即食冻干海参加工前处理工艺。研究发现:壳聚糖溶液浓度为0.50 g/100ml,超声温度为50℃,超声时间为45 min,超声波频率为53 k Hz,复水时间为96 h时,盐渍海参的复水率达到4.65倍,复水后海参总蛋白含量为55.75 g/100g,胶原蛋白为36.71 g/100g,水溶性蛋白含量为2.73 g/100g,海参水分含量为82.65%;而传统水发120h后,海参的复水率、总蛋白、胶原蛋白、水溶性蛋白分别为4.73倍、54.30 g/100g、35.02 g/100g、2.15 g/100g;由此可见,壳聚糖/超声波辅助复水方法不仅缩短了复水时间,而且海参的营养成分得到了更好的保留。并且超声复水后海参的质构也更为适宜,硬度、弹性、胶黏性、咀嚼性分别为7.29N、4.25mm、4.64N、10.8mj。2、利用真空低温加工技术,在真空度为0.08 Mpa条件下,考察了不同的温度和时间下,海参总蛋白、胶原蛋白、溶出蛋白、水分含量、感官以及质构的变化情况,探索了海参真空加工条件,优化确立了最佳加工工艺。结果表明:海参最佳的真空加工温度为90℃,最佳加工时间为80 min,该条件下即食海参的感官评分最高,同时也具有最佳的硬度、弹性和咀嚼性,分别为5.27 N、2.40 mm、11.13 mj;真空低温加工后的海参总蛋白、胶原蛋白保留较好,分别为47.00 g/100g、32.00 g/100g;溶出蛋白相对较少,含量为1.70 g/100g,水分含量68%。3、利用真空冷冻干燥技术,选取不同的冻干曲线,考察在不同的冻干温度、冻干时间以及选取的相应的温度和时间梯度条件下,分析了冻干前后即食海参总蛋白、胶原蛋白、水分含量、色泽以及质构的变化情况,探索了即食海参真空冷冻干燥工艺条件,优化确立了最佳冻干曲线。研究发现:海参真空冷冻干燥的最佳冻干时间为36 h、升华温度为25℃、冰晶温度为-26℃。该条件下即食海参冻干后水分含量最低,冻干效果最好。水分含量为3.75%,总蛋白含量为63.90 g/100g,水溶性蛋白为2.79 g/100g,胶原蛋白为36.28 g/100g。4、利用气相色谱-质谱联用技术分析了即食海参冻干片加工过程各环节的海参主要风味物质的变化情况,探讨了不同的加工方式以及不同的温度和时间对海参风味物质的影响。结果表明:海参的风味物质主要包括醇类、烃类、酮类、醛类等,其中对海参的风味影响较大的主要是醇类、烃类、醛类,通常占风味物质整体的90%以上。真空低温加工的即食海参,随着加工温度的升高,烃类物质的相对比例相对增大,酮类物质的相对比例相对稳定,醛类和醇类物质的相对比例有所下降;即食海参真空冷冻干燥,随着冰晶温度的降低,升华温度的升高,冻干时间的延长,冻干后烃类、醇类、酮类、醛类等物质的种类以及相对含量均有所下降。
白宇鑫[3]（2021）在《Ⅰ型胶原/大颗粒煅烧骨粉构建软骨组织工程支架最佳比例探索及理化性能初步研究》文中研究指明研究背景目前由交通事故、建筑事故、工伤、肿瘤及各种疾病所导致的软骨缺损病人数量日益增加,如何修复已损失的软骨一直是国内外科研团队研究的热门课题。目前修复方式主要分为两种:自体/异体移植与组织工程软骨。然而软骨自体/异体移植存在供体有限、可移植软骨数量过少、免疫排斥等问题,导致大面积软骨缺损的治疗效果非常有限。软骨组织工程的发现与研究,为软骨缺损的治疗提供了新的治疗方向。组织工程三大重要组成之一就是支架材料的选择,主要分为人工材料和天然材料。人工合成材料优点是价格低廉,力学性能及降解速度可控等,但也存在很多缺点:生物相容性差,有毒试剂残留,降解产物呈酸性从而导致炎症反应等;天然材料因其免疫原性低,降解产物可吸收,生物相容性好,相比人工合成材料具有不可替代的优势。牛煅烧骨粉是自然骨质经由煅烧而形成,与人骨成分相近,主要组成是羟基磷灰石,大量的孔隙通道是其自身结构特点,切具有良好的生物相容性及诱导细胞分化成骨性,其众多的优势使其成为理想的支架材料,是较早被应用于骨及软骨修复的生物材料之一;大颗粒煅烧骨粉相比普通煅烧骨粉,在保有原来优点的基础上,具有更大的孔径结构,更适宜细胞黏附和生长。胶原在人体内普遍存在,是软骨中主要的有机成分,易降解,免疫原性低且易与细胞结合,并且可以诱导软骨细胞向组织分化。因此本研究中,我们拟选用天然材料:I型胶原和大颗粒煅烧骨粉构建组织工程支架,探索胶原/大颗粒煅烧骨粉在支架中的最佳比例,旨在为组织工程软骨的最优支架提供选择。目的构建不同比例大颗粒TBC/Co LⅠ复合支架评价其理化性质及生物学性能,获得最优TBC/ColⅠ比例,为临床上软骨缺损的替代材料提供理论依据。方法（1）酸溶法溶解Ⅰ型胶原,加入大颗粒煅烧骨粉,通过改进后的真空冷冻干燥工艺,辅以交联剂,制备出符合要求的不同胶原/骨粉比例的成形支架。（2）通过在制备过程中的观测和对比,初步挑选出形态相对更好的胶原/骨粉不同比例支架,以进行下一步的详细检测及对比。（3）对选出的支架进行理化性能及生物相容性的测定,包括:支架形态大体观察,SEM微观结构观察,弹性模量及吸水率、孔隙率、密度、降解率的测定、DIO荧光染色观察、动物体内降解实验等。结果（1）Ⅰ型胶原溶解于乙酸中,经改良过的交联以及改良后的冻干工艺后,杂乱无序且较为致密的空间结构,转变为更为有序、孔隙更大、更为疏松的适合细胞附着及生长的结构。（2）通过实验对比不同胶原-骨粉比例所形成的支架,选定胶原浓度为6mg/ml,胶原-骨粉比例为1:7,1:9,1:11制备支架进行下一步对比试验。（3）孔隙率、吸水率、弹性模量、荧光染色观察及动物实验等结果,均显示胶原/骨粉比例为1:9时,支架性能最佳,生物相容性及理化性质更复合组织工程支架的要求。结论（1）成功构建不同比例Ⅰ型胶原/大颗粒煅烧骨粉支架。（2）证明了以6mg/ml的胶原/乙酸溶液浓度,1:9配比是胶原/骨粉最佳比例。通过改进后的混合搅拌工艺及交联、冻干方法,可以获得孔隙率更高,生物相容性更好,降解率更低,弹性模量更强的支架,故更适宜作为一个理想组织工程支架。
蒋术林[4]（2021）在《秸秆预处理对铬革屑胶原蛋白厌氧发酵影响的研究》文中认为我国是传统农业大国,农作物秸秆产量巨大、种类丰富。据统计,我国农作物秸秆年产量大约为8.4×108t,但由于长期以来简单粗暴的处置方式,不仅会导致资源浪费,还是雾霾、森林火灾等生态环境问题的重要诱因。如今,普遍的研究表明,厌氧发酵技术是一种可实现农作物秸秆资源化处置的高效手段,通过此方法可将农作物中难以被直接利用的生物质转化为乙醇、氢气、甲烷等清洁能源。通过此方法,不仅能够缓解化石能源资源缺乏的压力,还能减轻不当处理秸秆带来的环境风险。但秸秆表面蜡质层的存在和秸秆中纤维素和木质素紧密交联的特性,会降低厌氧发酵产气效率,所以在厌氧发酵前对秸秆进行预处理是很有必要的。本论文通过碱-酶结合法水解秸秆的单因素试验,确定了水解秸秆纤维素酶和木聚糖酶的酶比例、酶量、固液比和水解时长。通过凝胶色谱法对稻秸、麦秸水解液冻干物进行了分子量分布分析。将碱预处理后的稻秸、麦秸和稻秸水解液、麦秸水解液与脱铬革屑胶原蛋白液进行混合厌氧发酵,探究不同碳氮比、不同预处理程度对厌氧发酵产气特性的影响,分析厌氧发酵过程中发酵体系pH、VFAs浓度、SCOD浓度、氨氮浓度的变化。通过16rRNA高通量测序对发酵后发酵体系进行微生物多样性分析。主要结果如下:（1）纤维素-木聚糖酶单因素试验最佳水解条件为:酶比例3:2,酶量300 u:200 u,固液比1:20,水解时长72 h。优化后的稻秸水解液还原性糖浓度最高为17.19 mg/L,还原性糖产率最高为84.04%;优化后的麦秸水解液还原性糖浓度最高为12.55 mg/L,还原性糖产率最高为69.00%。（2）通过凝胶色谱对稻秸、麦秸水解液冻干物进行分子量分布分析,得到稻秸水解液冻干物数均分子量为1214,重均分子量为1372;麦秸水解液冻干物数均分子量为1223,重均分子量为1356。（3）C/N为25:1时,以4.5 g（以TC记）稻秸、麦秸为碳源发酵的日产气量、总产气量和累计甲烷产量达到最高值分别为159.0 mL和190.0 mL、2002.1 mL 和 1944.0 mL、1221.3 mL 和 1277.2 mL,甲烷含量分别为61.0%和65.7%;以4.5 g（以TC记）稻秸、麦秸水解液为碳源发酵的日产气量、总产气量和累计甲烷产量达到最高值分别为200.0 mL和187.8 mL、2841.9 mL 和 2814.1 mL、1960.9 mL 和 1933.3 mL,甲烷含量分别为 69.0%和 68.7%。（4）C/N为25:1时,以稻秸、麦秸为碳源发酵的SCOD去除率分别为75.1%和58.6%,氨氮积累浓度分别为3108.0 mg/L和2532.9 mg/L;以稻秸、麦秸水解液为碳源发酵SCOD去除率分别为59.2%和74.7%,氨氮积累浓度分别为 2034.0 mg/L 和 1828.6 mg/L。（5）对C/N为25:1条件下的四个不同碳源发酵体系的微生物多样性分析发现四个不同发酵体系微生物组成差异较小,物种丰度差异不显着,Anaerolinea同为四个不同碳源发酵体系的优势菌种。
黄利[5]（2020）在《丝素蛋白仿生组织工程支架的成型、结构与性能研究》文中进行了进一步梳理在临床上,由于肿瘤切除、外伤、先天畸形等软组织损伤而导致的凹陷畸形会对患者的容貌及活动功能产生严重的影响,进而严重影响其心理健康和生活质量。因此,皮肤、脂肪、肌肉等这一类软组织的修复和重构已成为整形外科的重要问题之一,对提升患者的健康和生活质量意义重大。缺损所致的凹陷畸形若用组织或生物材料填充,能够克服组织供体有限,避免组织移植带来的免疫排斥、感染等问题。用于软组织修复和重建的支架需要具有与组织部位相匹配的结构与功能,从而有望实现对不同组织部位的个性化修复。因此,构建具有合适的力学性能、生物相容性、体内降解性和复杂仿生组织结构的生物材料支架,具有重要的意义。再生丝素蛋白（RSF）是从天然蚕丝中提取的蛋白质,具有良好的生物相容性和优异的力学性能,因此利用RSF为原料制备仿生组织工程支架具有巨大的应用潜力。利用传统的冷冻干燥、静电纺丝等方法所制备的支架材料存在结构简单、仿生程度不高的缺点。如何利用新技术实现RSF组织工程支架高仿生性制备仍存在巨大挑战。本文以RSF为基本原料,首先基于冰晶模板调控静电纺丝纤维支架孔尺寸的机制,利用梯度低温接收静电纺丝技术实现了梯度结构仿生支架的构建。其次,分析了纳米纤维网络对水凝胶增强作用机制,通过3D打印技术构建了RSF基多级孔结构个性化支架,提高了RSF基支架的仿生程度和力学性能。再次,考察了氧化纤维素纳米纤维改善墨水流变行为的作用机制,简化了RSF基打印墨水的成分,建立了基于3D打印技术构建具有各向异性结构仿生支架的新方法。最后,提出了高性能双网络水凝胶的设计思路,在RSF基水凝胶中引入共价交联的合成聚合物弹性网络,通过3D打印技术构建了RSF基水凝胶应变传感器,揭示了微米级纤维对水凝胶应变传感功能的影响,探究了RSF基3D打印支架在组织工程柔性传感领域的应用。（1）传统静电纺丝RSF纤维支架结构致密,孔尺寸小,阻碍了细胞渗透及营养物质、代谢废物传输。受水结冰过程的启发,建立了利用梯度低温场接收静电纺丝调控RSF纤维支架孔尺寸新方法。在低温板接收静电纺丝过程中,通过对纺丝环境相对湿度的调节发现,相对湿度为（50?3）%时,RSF纤维支架孔尺寸达到15.9?23.1μm,相比于传统纤维支架显着增大,且纤维形貌好;通过对接收板温度的调节,发现在相对较高的低温（-50℃）接收条件下,纤维表面会形成毫米尺度的更大孔结构。在此基础上,进一步通过调节接收温度等条件制备了孔尺寸在6?50μm范围梯度变化的RSF静电纺3D纤维支架。通过L929细胞的培养发现,传统的RSF纤维毡上细胞分布于表层,在RSF低温静电纺3D纤维支架上,L929细胞能够明显地向支架内部渗透生长。因此,通过多级温度场静电纺工艺可将传统静电纺小孔支架与低温静电纺大孔支架结合,从而制备孔径梯度变化的RSF仿生纤维支架,在人体全层皮肤修复中具有应用潜力。（2）静电纺丝的梯度多孔纤维支架,在一定程度上能够模拟比较简单组织的细胞外基质结构（ECM）,但是无法作为较复杂结构组织修复用支架。因此,为了进一步构建仿生度更高的组织工程支架,利用挤出式3D打印技术对RSF基墨水成型,以期构建出与天然组织机械性能相匹配、有仿生结构的水凝胶支架。以RSF/明胶作为基础墨水,通过向其中加入少量的细菌纤维素纳米纤维（BCNFs）,一方面,提高RSF/明胶混合墨水的可打印性,获得高保真度的打印支架;另一方面,提高打印支架的力学强度。随着RSF/明胶墨水中BCNFs添加量从0wt%增加到1.4 wt%,打印线条拉伸测试的杨氏模量从（315.3±104.4）k Pa提高到（1627.8±433.4）k Pa。从打印效果来看,虽然随着RSF/明胶墨水中BCNFs含量增加,打印支架保真度提高,但是混合墨水中过多的BCNFs含量会导致打印针头频繁堵塞,打印分辨率降低,打印支架保真度下降。所以,当RSF/明胶墨水中BCNF含量为0.7wt%时,打印支架保真度最高,且在30%压缩应变时压缩强度相对于空白对照组提高了2倍。BCNFs-0.7wt%的压缩弹性模量为（186.5?20.2）k Pa,符合人体某些软组织弹性模量要求。另外,在RSF/明胶/BCNFs的打印支架中,BCNFs形成三维网络结构,使得RSF/明胶/BCNFs打印支架具有良好的压缩回弹性。而且,BCNFs与RSF/明胶分子链之间形成大量的氢键,通过氢键的破坏,可耗散压缩过程中的部分能量,使BCNFs-0.7wt%打印支架的耗散能达3.7 k Jm-3。RSF/明胶/BCNFs水凝胶打印支架经过冷冻干燥后,BCNFs使得打印线条中形成相互贯通的微孔结构（10?20μm）,结合打印调控的线条间大孔结构（300?600μm）,从而获得具有多级孔结构支架,这种多级孔支架对细胞渗透生长、组织再生具有明显的促进作用。因此,在3D打印水凝胶中引入少量纳米纤维,可打印出高性能的多级孔仿生支架,从而有望应用于复杂软组织的修复重建。（3）RSF/明胶/BCNFs打印支架需要经过额外的后处理对其中的RSF/明胶进行交联。为了简化打印墨水的成分及改进交联方法,本文进一步探究了无明胶添加时,利用四甲基六氢吡啶氧化物（TEMPO）氧化处理的细菌纤维素（OBC）纳米纤维来增稠RSF溶液,进而制备一种更加简单的二元可打印水凝胶墨水,并利用辣根过氧化物酶/双氧水（HRP/H2O2）催化交联RSF分子链上的酪氨酸获得3D打印的RSF/OBC水凝胶支架。红外光谱结果表明,HRP/H2O2催化RSF交联后,RSF主要以无规卷曲结构存在,所得水凝胶因此弹性较好。OBC纳米纤维一方面改善了RSF的流变性能,增加了RSF/OBC墨水的可打印性和打印精度,另一方面提高了RSF水凝胶支架的力学强度。其中,RSF/OBC在质量比为1/1时,水凝胶的最大压缩强度可达（267.0?13.0）k Pa,压缩应变超过50%。RSF/OBC墨水中OBC纳米纤维通过打印针头剪切后,会沿着打印线条长轴方向发生一定程度的取向排列,1RSF-1OBC的打印线条中OBC纳米纤维的取向度达到60%。肺上皮干细胞在1RSF-1OBC的打印支架上能够大量增殖,并且能够沿着打印线条上OBC纳米纤维排列方向定向生长。培养一周后,肺上皮干细胞仍然能够维持干性并保持其上皮表型。因此,3D打印的1RSF-1OBC水凝胶支架在肺组织工程再生研究中具有较大的潜力。（4）为了进一步拓展3D打印RSF基水凝胶支架的功能,本论文在RSF水凝胶网络中引入具有生物相容性的共价交联的聚丙烯酰胺（PAM）网络,采用白光交联一步法制备PAM/RSF双网络水凝胶。利用氢氧化钠/尿素低温剥离蚕丝方法制备带负电荷的蚕丝微纤维（SMF）,进而利用SMF与RSF静电相互作用形成物理凝胶聚集体,在PAM中形成物理交联点,从而获得一种高性能的PAM/RSF/SMF双网络水凝胶,其拉伸断裂强度和压缩模量（5%?10%应变）可分别达（256.5?11.5）k Pa和（617.4?67.1）k Pa;断裂伸长率超过500%。一方面SMF可以提高水凝胶的力学强度,另一方面利用RSF/SMF物理凝胶增稠丙烯酰胺单体（AM）溶液,制备出可打印的水凝胶墨水。这种双网络水凝胶在磷酸缓冲生理盐水（PBS）中浸泡后具有良好的离子导电性,具备应变和压力传感功能,使得生物力学刺激环境下的组织再生有望实现在位监测。
张玲[6]（2020）在《罗非鱼皮胶原降解反应行为及肽钙螯合物制备研究》文中指出罗非鱼加工过程中会产生大量的鱼皮,其含有大量的蛋白质,具有较高的利用价值。本文以罗非鱼新鲜鱼皮为原料提取胶原,采用酸热处理降解生成明胶化胶原,并开展了明胶化过程的系统研究;为解决含鱼明胶体系中胶原蛋白肽含量测定的诸多问题,对双缩脲法测定罗非鱼源胶原蛋白肽含量的方法进行了改良及应用评价;对一种来自于枯草芽孢杆菌的碱性胶原蛋白酶进行了分离纯化、酶学性质及结构模拟研究,并采用磺化聚苯乙烯（sulfonated polystyrene,SPS）纳米粒子固载胶原蛋白酶;以固定化酶水解罗非鱼皮明胶化胶原制备胶原蛋白肽为研究体系,基于蛋白质结构知识和3-D模型解析了多组分复杂体系的动态降解行为;以酶解得到的胶原蛋白肽为原料制备了肽钙螯合物,优化了螯合工艺,研究了螯合物的稳定性,并采用Caco-2细胞模型评价了螯合物体外促钙吸收作用。具体研究结果如下:（1）以罗非鱼新鲜鱼皮和鱼鳞为原料,通过纤维组织观察发现罗非鱼皮中主要为Ⅰ型胶原;采用单纯醋酸提取及胃蛋白酶辅助醋酸提取两种方法制得了鱼皮、鱼鳞酸溶性胶原（ASC）及酶促酸溶性胶原（PSC）,对产物进行了系统表征及性质对比分析。结果表明:鱼皮ASC和PSC的纯度分别为85.69%、72.88%,鱼鳞ASC和PSC纯度分别为70.35%、73.92%;产物氨基酸组成中含量最多的是甘氨酸,分别为20.85%、21.01%、21.16%和19.21%,符合胶原蛋白的一级结构特征;鱼皮和鱼鳞ASC、PSC的紫外最大吸收分别在234 nm、222 nm、236 nm、226 nm处,符合胶原特征;鱼皮和鱼鳞ASC、PSC的热收缩温度分别约为89.0℃、81.3℃、74.0℃、70.7℃;FT-IR表明四种胶原产物皆保留了天然的三螺旋结构;高效凝胶色谱（GPC）测得鱼皮ASC和PSC、鱼鳞ASC和PSC的重均相对分子质量分别为139570 Da、20891 Da、131909 Da、20428 Da,从分子量大小及分布来看,鱼皮ASC最接近于天然胶原,在医用及保健食品领域具有更好的应用价值。（2）以罗非鱼皮酸溶性胶原（ASC）为原料,用酸法诱导其明胶化并用热水提取明胶。采用红外光谱、圆二色谱、SDS-PAGE电泳、DSC热稳定性分析对胶原明胶化过程进行研究。结果表明:不同酸处理时间后的明胶化胶原产物的红外光谱在1460～1230cm-1附近吸收峰的尖锐度明显降低,判定胶原三螺旋结构逐渐发生解旋;酸处理4 h时胶原明胶化程度较高,明胶提取率可达到77.41%;DSC与SDS-PAGE电泳分析结果显示,酸处理造成胶原三螺旋结构的解旋和高分子亚基的降解,酸处理的前4 h内这两个过程处于平衡阶段,4 h后以高分子亚基降解过程为主,因此,确定酸处理时间少于4 h可获得较高品质的明胶。（3）以罗非鱼皮胶原蛋白肽为对照品,改良双缩脲比色法测定肽含量的操作方法,探讨了本体系中显色络合物最大吸收波长、线性拟合度高的肽和三氯乙酸（TCA）浓度范围、p H;在最优条件下对标准曲线进行了重复性、精密度评价以及加样回收率的实验并进行了应用评价。结果显示,当胶原蛋白肽（标称分子量3 KDa）质量浓度在0.3～1.5mg/m L范围内,使用13%TCA,p H 12.5,在545 nm处检测,吸光值与肽质量浓度线性拟合好（R2=0.999）;重复性和精密度试验得到RSD分别为1.86%和1.84%,加样回收率分别为113.9%、109.7%,RSD分别为1.39%、1.00%;线性范围宽、重复性好、准确度高。将本法应用于不同种类罗非鱼肽产品体系的检测,加样回收率相差小,偏差较小,说明本法简便、快捷,适用于罗非鱼源肽含量的检测。（4）对一种来自枯草芽孢杆菌的酶制剂进行了分离纯化、酶蛋白结构鉴定及酶学性质研究。结果表明,纯化工艺可使酶比活力提高到608.17 U/μg;其分子量约为31.0 KDa;质谱鉴定得到该酶的氨基酸序列并模拟得到1个蛋白质三维结构,推测该酶可能属于枯草杆菌蛋白酶家族成员。在鱼皮胶原蛋白水解体系中,酶最适反应温度为60℃,最适反应p H为7.4;在低于40℃下具有良好的热稳定性,在p H 5.0-7.0范围内具有良好的酸碱稳定性;米氏常数为88.22 mg/m L,催化效率为26.37 m L·mg-1·min-1;Al3+、Fe3+、Fe2+、Pb2+、Ba2+、Mg2+、Zn2+、Mn2+对酶有不同程度的抑制作用,巯基乙醇与乙二胺四乙酸（EDTA）能够使其酶活性下降至60%左右,乙二醇双（2-氨基乙基醚）四乙酸（EGTA）能够使该酶完全失活。采用SPS纳米球固载酶的最优条件为:SPS纳米球乳液与酶液的体积比为3:50（m L:m L）、固载温度为25℃、固载体系p H为4.5;在此条件下,胶原蛋白酶的固载率为73.48%,比活力为274.05 U/μg;固定化酶比活力约为游离酶比活力的53.74%。（5）为展现罗非鱼皮明胶化胶原在固定化碱性蛋白酶降解作用下的酶解行为及结果,基于高效凝胶色谱（GPC）和液质联用（HPLC-MS/MS）检测手段,结合生物信息学知识,运用计算机模拟及图像处理技术,绘制了可表征酶解反应过程动态特性的3-D图,拟合得到了酶解动力学方程,验算得知模型的平均相对误差为5.72%;以抗氧化能力作为评价依据,对水解180 min时的酶解物进行了质谱测序研究,鉴定得到10个片段,并采用Chem Draw19.0-Chem3D软件对肽片段分子结构进行了预测。（6）以标称分子量分别为1 KDa、3 KDa、5 KDa的罗非鱼皮胶原蛋白肽粉和无水氯化钙为原料,研究肽钙螯合物制备工艺的优化。采用响应面试验法优化螯合工艺条件结果表明,最优条件为p H7.00、温度40℃、肽钙质量比7:1、时间30.00 min,此条件下钙螯合率为39.5%±0.5%。对产物进行傅里叶红外光谱、扫描电镜和能谱表征分析以及稳定性评价,结果显示,钙离子被成功螯合;肽钙螯合物在高温下不稳定,温度越高钙结合量下降越快;在酸性环境下易于解离,酸性环境影响比碱性环境大;在与乳糖及氯化钠共存的环境中较为稳定;胃蛋白酶及胰蛋白酶会分解肽钙螯合物,且胰蛋白酶的影响作用比胃蛋白酶大;采用Caco-2单层细胞模型体外评价了肽钙螯合物对钙促转运的作用,发现螯合物浓度在3 mg/L以上时具有良好的促钙转运效果;当3 h时,7 mg/L肽钙螯合物对钙的促转运能力达到2.52μg/mg,促钙吸收率为41.04%,优于罗非鱼皮蛋白肽（Val-Gly-Leu-Pro-Asn-Ser-Arg）钙螯合物,弱于鳕鱼皮胶原蛋白肽（Ala-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Arg）钙螯合物。
董中华[7]（2020）在《人工虫草CPD0300活性组分对糖尿病肾病的治疗作用及其制剂研究》文中提出现代人的不良饮食习惯和生活方式造成了全球糖尿病患病率的惊人增长,糖尿病已成为继高血压之后的第二大类疾病,给患者带来了沉重的生活和经济负担。糖尿病肾病是糖尿病的主要微血管并发症,也是终期末端肾病首要诱因。糖尿病肾病的特征表现为蛋白尿,肾基底膜增厚、系膜扩张,持续性的肾纤维化和进行性的肾功能下降。糖尿病肾病所带来的肾功能减退不但会缩短患者的预期寿命,还会增加心血管疾病的发病风险,严重影响患者的生活质量。目前,糖尿病肾病的治疗尚无针对性的特效药物,主要通过改善生活方式、控制血糖、控制血压、纠正脂质代谢紊乱等方式来延缓糖尿病肾病的病情进展。因此,糖尿病肾病防治药物的研究具有重要的社会和经济意义。中药在我国具有悠久的历史,各种中药及其提取物对糖尿病肾病的治疗作用已有较多的研究,对中药发挥治疗作用的物质基础和分子机制的探索成为当前研究的热点。冬虫夏草是一味具有补肺益肾效果的传统中药,而通过发酵工艺制备的人工虫草弥补了野生虫草产量的严重短缺,这些野生和人工虫草已被广泛用于包括糖尿病肾病在内的各类肾脏疾病的治疗,并取得了良好的临床效果。目前对冬虫夏草治疗糖尿病肾病的活性组分、作用机制和药用制剂的研究仍然处于起步阶段。多数研究仅停留在冬虫夏草菌粉及其粗提物治疗糖尿病肾病的研究上,而市场上的虫草制剂也仅是填充有虫草粉末的简单胶囊剂。尽管有关虫草多糖的少量研究见诸报端,但是仍然缺乏对冬虫夏草治疗糖尿病肾病的具体活性组分、作用机制和高端制剂的系统性研究。为了进一步探索虫草作为糖尿病肾病防治药物的奥秘,本课题以医药市场上常用的人工虫草为原料药开展了抗糖尿病肾病的人工虫草活性组分分离、活性筛选、作用机制以及改良制剂的研究。本课题的研究内容主要由以下四个部分构成:（1）人工虫草各组分的分离纯化及初步抗糖尿病肾病活性筛选;（2）人工虫草活性组分对实验性糖尿病肾病的治疗作用及机制研究;（3）人工虫草改良制剂的制备及其药物动力学研究;（4）活性成分麦角甾醇纳米制剂的制备、表征及体内药物动力学和体外药效评价。（1）人工虫草各组分的分离纯化及初步抗糖尿病肾病活性筛选本部分的工作重点是对人工虫草中含量丰富且具有良好生物活性的多糖类、核苷类和甾醇类组分（有效部位）进行分离纯化以及初步抗糖尿病肾病活性筛选。多糖类组分是通过水提醇沉法将多糖从冬虫夏草中初步分离出来,再经过Sevage试剂脱蛋白、双氧水脱色、透析法去除小分子物质进行纯化得到纯化的多糖样品。对所制备的人工虫草多糖样品进行质量评价,发现样品中的多糖含量为49.73%（以葡萄糖计）,样品中含有糖类物质、不含还原性的单糖和蛋白质。核苷类组分是通过将冬虫夏草水提后分别过大孔树脂柱和葡聚糖凝胶柱而得到纯化后的冬虫夏草核苷提取物（CS-N）。采用LC-DAD法和LC-MS法对样品中的核苷类成分进行了定性和定量分析,鉴定出的10种核苷类化合物分别是尿嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤、次黄嘌呤、胞苷、尿苷、腺苷、2’-脱氧腺苷、鸟苷和胸苷,其中鸟苷含量最高。甾醇类组分通过乙醇提取将甾醇类成分从冬虫夏草中提取出来,然后经过乙酸乙酯萃取、硅胶柱分离、重结晶纯化得到冬虫夏草甾醇提取物。采用LC-DAD法和GC-MS法对甾醇提取物中的甾醇类成分进行分析,结果表明其主要成分是麦角甾醇,含量可以达到92%,故用市售麦角甾醇进行后续研究。对上述人工虫草组分的抗糖尿病肾病活性初筛工作包括体外建模及活性筛选。以高糖诱导的大鼠肾系膜细胞为模型,以细胞外基质性成分纤连蛋白和1型胶原蛋白为筛选指标。初步活性筛选结果表明在三类主要有效组分中核苷提取物和甾醇提取物（麦角甾醇）对细胞外基质表达的抑制作用更为明显。（2）人工虫草活性组分对实验性糖尿病肾病的治疗作用及机制研究鉴于虫草多糖研究的文献报道较多,本课题重点考察了核苷提取物和甾醇提取物（麦角甾醇）对实验性糖尿病肾病的治疗作用,并初步探索了其作用机制。核苷提取物（CS-N）的抗糖尿病肾病研究包括体内外建模以及对作用功效、信号通路的探索。体外研究选择了高糖刺激的HK-2细胞模型,其功效研究结果表明CS-N治疗能够有效抑制高糖诱导的上皮间质转分化和细胞外基质积聚。体内模型为STZ诱导的C57BL/6小鼠模型,CS-N灌胃给药40、80mg/kg/day,连续给药8周。体内研究结果表明,CS-N治疗能够有效恢复糖尿病肾病小鼠的体重,改善其肾功能;高血糖导致的小鼠肾脏细胞损伤、肾小球肥大、系膜扩张和糖原胶原沉积状况在CS-N给药治疗下也得到明显改善;信号通路研究结果显示CS-N给药抑制了 p38和ERK信号通路的活化,进而减轻了上皮间质转分化和细胞外基质的沉积。甾醇提取物（麦角甾醇）抗糖尿病肾病研究中的体内外建模和作用功效与核苷提取物（CS-N）的研究内容相似,主要不同点在于其作用机制的差异。体外研究通过高糖刺激肾系膜细胞构建了糖尿病肾病细胞模型。体外功效研究结果表明麦角甾醇可以抑制高糖诱导的肾系膜细胞异常增殖和细胞外基质性成分的过度表达;作用机制研究发现麦角甾醇能够下调TGF-β1的表达,抑制Smad2的磷酸化水平并调节其下游信号来发挥其抗糖尿病肾病作用。体内研究对STZ诱导的C57BL/6糖尿病小鼠灌胃给药麦角甾醇10,20,40 mg/kg/day,连续给药8周。体内研究结果表明,麦角甾醇给药可以增加糖尿病肾病小鼠的体重,改善小鼠胰岛β细胞功能,恢复肾功能;另外,麦角甾醇还能显着改善STZ诱导的糖尿病小鼠肾组织中肾小球体积增大、系膜基质扩张、肾小管间质损伤以及糖原和胶原沉积的状况;体内的作用机制研究显示麦角甾醇在体内通过与体外同样的信号通路来起到治疗糖尿病肾病的作用。（3）人工虫草改良制剂的制备及其在大鼠体内的药物动力学研究麦角甾醇是冬虫夏草治疗糖尿病肾病的重要活性成分,但水溶性极差,这将影响冬虫夏草口服给药后麦角甾醇从菌粉中的溶解和释放以及在胃肠道的吸收,从而影响口服生物利用度。因此,需要制备一种能够增加麦角甾醇溶解度的人工虫草改良制剂,该制剂的研究工作主要是对增溶剂的筛选。我们首先考察了不同增溶技术对麦角甾醇的增溶作用,测定了麦角甾醇在几种常用增溶剂和潜溶剂中的溶解度;结果表明SDS对麦角甾醇的增溶效果最好,故选择将SDS用于冬虫夏草提取物中制备改良制剂。改良制剂的药代动力学研究包括方法学的建立以及药代动力学参数的考察。我们建立了大鼠血浆中麦角甾醇的LC-MS含量测定方法,方法学验证结果表明所建方法的线性关系良好、专属性强、精密度和准确度高、回收率高、稳定性好,可以用于麦角甾醇的药物动力学研究;在大鼠体内的药物动力学研究表明,人工虫草改良制剂能显着提高冬虫夏草口服给药时麦角甾醇的血药浓度和生物利用度。由此推测,相比于人工虫草菌粉直接给药,人工虫草改良制剂用于糖尿病肾病的治疗可能能够降低给药剂量、提高治疗效果。（4）麦角甾醇纳米脂质载体的制备和评价鉴于麦角甾醇具有良好的抗糖尿病肾病活性,本部分的研究制备了麦角甾醇纳米脂质载体（ERG-NLC）,以提高麦角甾醇的溶解度和口服生物利用度。这些工作为后续麦角甾醇相关产品的开发奠定了理论和实验基础。麦角甾醇纳米脂质载体的研究工作包括剂型选择、工艺和处方优化、制剂表征和体内外评价。我们选择生物相容性良好、稳定性高的纳米脂质载体作为麦角甾醇纳米制剂的剂型。制剂的工艺和处方研究以包封率为主要考察指标,对工艺和处方进行了单因素筛选和正交设计优化,最终选择以单硬脂酸甘油酯和癸酰基/辛酰基甘油酯作为脂质材料、以吐温80、Pluronic F68和卵磷脂作为乳化剂、采用乳化-超声法制备ERG-NLC。所制备的ERG-NLC分散液为近澄明有淡蓝色乳光的液体,纳米颗粒呈球形、表面圆整、无粘连,包封率和载药量分别为92.9%和6.51%,粒径为85.72 nm,zeta电位为-30.77 nmV,制剂稳定性良好。为方便包装、储存和运输,通过冻干保护剂的筛选,确定以5%的甘露醇作为冻干保护剂将ERG-NLC制备成冻干制剂。所制备的ERG-NLC冻干产品具有良好的外观和再分散性;质量评价结果表明冻干过程对制剂包封率、载药量、粒径、电位和微观形态影响较小;DSC和X-射线衍射的物相分析结果表明麦角甾醇已被包裹或吸附在纳米脂质载体中,形成了新的物相。以大鼠为药物动力学研究模型,考察口服药物动力学参数的变化;通过MTT法和Western blot法研究ERG-NLC对高糖诱导的RMC细胞增殖和细胞外基质积累的影响。药代动力学和体外药效研究结果表明ERG-NLC显着增加了麦角甾醇的口服生物利用度,增强了其对高糖诱导的肾系膜细胞的增殖和细胞外基质积聚的抑制作用,提高了体外抗糖尿病肾病活性。综上所述,本课题对人工虫草的各组分进行了分离纯化和初步活性筛选,并研究了核苷类组分和甾醇类组分对糖尿病肾病的治疗效果和作用机制:核苷提取物能够通过抑制p38/ERK信号通路的活化来减轻上皮间质转分化和细胞外基质的沉积,麦角甾醇则通过调节TGF-β1/Smad2通路抑制肾系膜细胞的过度增殖和细胞外基质的积聚;针对抗糖尿病肾病活性成分麦角甾醇水溶性差的问题,本课题分别制备了人工虫草改良制剂和麦角甾醇纳米脂质载体:人工虫草改良制剂能有效提高麦角甾醇的口服生物利用度,麦角甾醇纳米脂质载体显着增加了麦角甾醇的口服生物利用度、提高了其体外抗糖尿病肾病活性。本课题为冬虫夏草抗糖尿病肾病的物质基础和作用机制的研究提供了实验数据,为后期虫草制剂的改良和麦角甾醇相关产品的开发提供了理论和实验依据。
耿嘉宝[8]（2021）在《牦牛头蹄脱毛工艺及其胶原蛋白的初步研究》文中研究表明以青藏高原牦牛头皮,牦牛蹄皮为原料,采用国标方法分析了基本成分组成,探讨了复合酶脱毛工艺、胃蛋白酶酶解提取胶原蛋白工艺,进而分析了胶原蛋白的结构及其氨基酸的组成,对复合酶制备的胶原蛋白肽进行了计算机模拟酶切,获得如下结论:复合酶脱毛最佳工艺参数为酶液浓度1482U/mL,酶解pH7.0,酶解时间3.02h,酶解温度50℃;牦牛头皮中水分为54.22%,粗蛋白39.02%,脂肪3.65%,灰分1.11%,牦牛蹄皮中含水分61.44%,粗蛋白34.67%,脂肪2.09%,灰分1.06%。说明牦牛皮是一种优质蛋白质来源,且牦牛皮不同部位成分具有差异性;胃蛋白酶提取牦牛皮胶原蛋白最佳酶解工艺参数为:酶解时间17.9h、酶添加量2.0%、料液比1:25、温度34℃,经过验证得到提取率为26.37%;胃蛋白酶提取法能够保留胶原蛋白三螺旋结构,且较为完整,牦牛皮胶原蛋白具有典型Ⅰ型胶原蛋白的结构特征;.牦牛皮胶原蛋白具有多种Ⅰ型胶原的结构特征;牦牛皮胶原具有18种氨基酸,其中甘氨酸（Gly）含量最高,占总氨基酸含量的31%,其次为脯氨酸（Pro）及羟脯氨酸（Hyp）,复合Ⅰ型氨基酸分布特征;复合酶制备牦牛皮抗氧化肽确定脱毛最佳工艺参数为酶解时间4.00h,酶添加量5860.45 U/g,底物浓度2.98%,温度50℃。
赵禹彤[9]（2020）在《罗伊氏乳杆菌冻干保护剂的筛选及在发酵乳中的应用》文中认为本研究得到吉林省校共建项目（SF2017-6-4）的支持。罗伊氏乳杆菌作为一种定植于人和哺乳动物肠道内的乳酸菌,具有一定的益生作用。本实验使用的罗伊氏乳杆菌F-9-35是经地面罗伊氏乳杆菌太空诱变后筛选而来。罗伊氏乳杆菌F-9-35不仅能够耐受低pH和胆盐的恶劣环境,在缓解胃肠炎方面也有一定的作用。本实验分别对罗伊氏乳杆菌F-9-35的部分生物学性质、冻干保护剂的筛选和优化、冻干菌粉的耐受性和贮存稳定性以及在发酵乳制备中的应用四个部分进行了探究。主要研究结果如下:1.罗伊氏乳杆菌F-9-35在37℃条件下培养10h进入稳定期,对连续传代培养10次后的菌株进行16s rDNA测序,结果表明F-9-35遗传稳定性良好。罗伊氏乳杆菌F-9-35对酸和胆盐耐受性的实验结果表明,F-9-35在pH=3、4和0.1%胆盐条件下耐受性较好,培养3h后lg值分别变为初始值的0.97、1.06和1.02倍,但在pH=2以及0.3%和0.5%胆盐条件下的耐受性要明显弱于前者。与地面菌株GS-23的对比实验发现,在pH=2以及0.3%和0.5%胆盐中时培养3h后F-9-35的lg值显着高于GS-23。2.本实验对海藻糖、麦芽糊精、草菇多糖提取物、金针菇多糖提取物、杏鲍菇多糖提取物、银耳多糖提取物、木耳多糖提取物、鱼胶原蛋白肽、大豆低聚肽、猪皮肽、蛙皮肽11种冻干保护剂进行了筛选。根据单因素实验结果选择麦芽糊精、草菇多糖提取物、鱼胶原蛋白肽三种物质作为响应面试验优化的因素。最终确定罗伊氏乳杆菌F-9-35的保护剂配方为19%麦芽糊精、12%草菇多糖提取物、10%鱼胶原蛋白肽,此时F-9-35的存活率为68.91±2.80%。3.探究了罗伊氏乳杆菌F-9-35冻干菌粉对人工模拟胃肠液的耐受能力,结果表明罗伊氏乳杆菌F-9-35冻干菌粉在模拟胃液中培养4h活菌数为2.68±1.13（×109cfu/g）,在模拟肠液中处理10h后活菌数为2.00±0.17（×109cfu/g）。而未经保护的菌体在相同条件下活菌数均下降了2个数量级。两个实验都表明冻干菌粉的耐受性明显优于未保护的菌体。此外,实验还测定了罗伊氏乳杆菌F-9-35冻干菌粉在不同贮存条件下活菌数的变化。冻干菌粉在4℃和-20℃条件下贮存60天后活菌数仍能维持在109cfu/g,25℃贮存60天后活菌数也在106cfu/g以上,表明在贮存过程中冻干菌粉的稳定性良好。4.实验探究了罗伊氏乳杆菌F-9-35发酵乳、混合发酵乳与传统发酵乳（嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌）的发酵特点及其在贮存期间指标的变化。结果表明混合发酵乳在41℃发酵4h后pH值下降至4.60,发酵时间少于罗伊氏乳杆菌F-9-35发酵乳（6h）和传统发酵乳（6h）。将发酵乳置于4℃条件下贮存4周,发酵乳各项指标的变化结果表明在贮存期内3种发酵乳的持水力始终在95%以上,F-9-35发酵乳的pH和酸度变化幅度最小,另两种发酵乳变化幅度无明差别。质构分析和粘度测定结果表明罗伊氏乳杆菌F-9-35发酵乳的硬度、胶着性和咀嚼性均高于其他两种发酵乳,但粘度值明显低于另两种发酵乳,始终在2500cp以下。3种发酵乳的活菌数在贮存期内均呈现降低的趋势。其中,罗伊氏乳杆菌F-9-35的活菌数下降幅度最大,经过4周的贮存后,lg值由9.24±0.015下降至8.21±0.058。传统发酵乳在贮存期内lg值由9.34±0.033下降至9.19±0.0015。对于混合发酵乳而言,乳酸菌总数lg值由9.14±0.0050下降至8.70±0.0050,其中罗伊氏乳杆菌F-9-35的lg值由8.08±0.01降低至7.00±0.035,但仍维持在106cfu/ml之上。
陈晓敏[10]（2020）在《基于丝素蛋白墨水材料的挤出式生物三维打印技术的研究》文中研究指明近年来,基于分层制造原理迅速发展起来的生物三维（3D）打印技术,为组织器官再生和临床修复治疗等生物医学领域带来了新的研究思路与解决方案。3D打印技术所用的生物墨水必须具备合适的交联机制来完成所需结构体成型,而且打印材料必须具备稳定的生物相容性和合适的力学性能。目前,适用于生物3D打印技术的生物墨水已经成为制约该技术发展的一个阻碍。丝素蛋白材料由于其良好的生物相容性、可控的生物降解性、无免疫原性以及来源丰富等优点,近年来在生物3D打印领域受到了研究者的广泛关注。但由于其自然凝胶过程缓慢,3D打印成型性差,限制了其在生物3D打印领域的应用。本论文基于挤出式生物3D打印技术,开发了一种纯丝素蛋白墨水材料的制备工艺,成功实现了纯丝素蛋白水凝胶的3D打印成型。通过工艺开发和优化,实现了打印支架宏观-微观结构的有效控制,并探讨了纯丝素蛋白墨水材料对电场和温度的依赖性,提出了电场和温度对丝素蛋白凝胶过程的调控机理。同时,还研究了所打印的纯丝素蛋白支架的细胞相容性和力学性能。通过本课题的探索研究,不仅可解决挤出式生物3D打印面临的部分技术难题,同时也提出了一种开发新型丝素蛋白墨水材料的研究思路。主要研究结果如下:（1）利用丝素蛋白材料凝胶化过程对电场和温度的敏感特性,在不添加任何其它化学物质的条件下,可控制备了可用于挤出式3D打印技术的纯丝素蛋白生物墨水材料。研究结果表明,稳定的电场作用可有效控制丝素蛋白水凝胶的流变性能,而丝素蛋白电凝胶的温敏特性可有效去除凝胶内部的气泡,通过精确的电场和温度控制可有效提高纯丝素蛋白墨水材料的可打印性。（2）通过SEM观察、原子力显微镜观察、傅立叶红外和X射线衍射等分析手段,研究了纯丝素蛋白墨水材料对电场和温度的依赖性,并初步提出了电场和温度对丝素蛋白凝胶过程的调控机理。研究分析发现电场和温度的变化并不会对丝素蛋白的晶体结构和蛋白质二级结构产生显着影响,所制备的丝素蛋白水凝胶墨水主要以无规卷曲结构为主。墨水材料制备过程中电场和温度调节丝素蛋白的凝胶-溶胶状态的转变主要是由于丝素蛋白纳米微球之间弱的氢键、静电作用和疏水作用所引起的。（3）系统考察了 3D打印过程中关键打印参数打印压力、温度、填充间距和打印层数对打印支架结构和机械性质的影响,获得了丝素蛋白墨水材料最佳3D打印工艺参数,即打印喷头温度和平台温度为5℃、打印压力为0.4 MPa,填充间距为1.5 mm时所打印的纯丝素蛋白3D支架具有最佳的形状保持性,打印支架的层数可达20层。同时,压缩力学性能测试结果表明,所打印的纯丝素蛋白三维支架在干态和湿态下都具有良好的力学性能和稳定性。（4）体外细胞培养实验结果表明,所打印的纯丝素蛋白三维支架可显着促进细胞在其表面的粘附、增殖和生长,并且三维打印的丝素蛋白支架的多级多孔结构可显着促进细胞向支架内部迁移和生长。值得注意的是,不添加其它化学物质所制备的纯丝素蛋白支架对保持材料本身优异的生物相容性至关重要。
二、胶原最佳冻干浓度的选择（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、胶原最佳冻干浓度的选择（论文提纲范文）
（1）海蜇胶原抗氧化肽的制备分离、结构解析及活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 海蜇概述 |
| 1.1.1 海蜇组成成分 |
| 1.1.2 海蜇胶原蛋白 |
| 1.1.3 海蜇胶原肽 |
| 1.2 活性氧自由基概述 |
| 1.3 食源性抗氧化肽概述 |
| 1.3.1 食源性抗氧化肽的制备 |
| 1.3.2 食源性抗氧化肽的分离鉴定 |
| 1.3.3 食源性抗氧化肽的评价方法 |
| 1.3.4 食源性抗氧化肽的构效关系 |
| 1.4 课题研究意义及技术路线 |
| 1.4.1 研究意义 |
| 1.4.2 技术路线 |
| 2 胶原蛋白结构特性研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料、试剂和设备 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2.2 实验仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 海蜇基本成分测定 |
| 2.3.2 胶原蛋白提取 |
| 2.3.3 胶原蛋白结构测定 |
| 2.4 统计分析 |
| 2.5 结果与讨论 |
| 2.5.1 海蜇基本成分分析 |
| 2.5.2 胶原蛋白亚基结构分析 |
| 2.5.3 胶原蛋白纯度分析 |
| 2.5.4 胶原蛋白二级结构分析 |
| 2.5.5 胶原蛋白氨基酸组成分析 |
| 2.5.6 胶原蛋白热稳定性分析 |
| 2.5.7 胶原蛋白结构分析 |
| 2.6 本章小结 |
| 3 海蜇胶原抗氧化肽制备及结构特性研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料、试剂和仪器设备 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 |
| 3.2.2 实验仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 酶解工艺研究 |
| 3.3.2 抗氧化能力研究 |
| 3.3.3 结构特性研究 |
| 3.4 统计分析 |
| 3.5 结果与讨论 |
| 3.5.1 酶解工艺优化结果分析 |
| 3.5.2 抗氧化能力分析 |
| 3.5.3 结构特性分析 |
| 3.6 本章小结 |
| 4 海蜇胶原抗氧化肽分离纯化及氨基酸序列鉴定 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料、试剂和设备 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 |
| 4.2.2 实验仪器与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 超滤分离 |
| 4.3.2 凝胶色谱分离 |
| 4.3.3 氨基酸序列鉴定 |
| 4.3.4 化学合成 |
| 4.4 统计分析 |
| 4.5 结果与讨论 |
| 4.5.1 超滤分离结果分析 |
| 4.5.2 凝胶色谱分离结果分析 |
| 4.5.3 氨基酸序列分析 |
| 4.5.4 合成及检测结果分析 |
| 4.6 本章小结 |
| 5 海蜇胶原抗氧化肽活性研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料、试剂和仪器设备 |
| 5.2.1 实验材料与试剂 |
| 5.2.2 实验仪器与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 化学抗氧化能力测定 |
| 5.3.2 肽段间相互作用测定 |
| 5.3.3 HepG2细胞培养 |
| 5.3.4 细胞毒性测定 |
| 5.3.5 细胞抗氧化活性测定 |
| 5.3.6 H_2O_2-HepG2细胞氧化损伤模型的构建 |
| 5.3.7 肽段对H_2O_2-HepG2细胞氧化损伤的保护作用 |
| 5.3.8 细胞内ROS水平测定 |
| 5.4 统计分析 |
| 5.5 结果与讨论 |
| 5.5.1 各肽段化学抗氧化能力分析 |
| 5.5.2 肽段间相互作用分析 |
| 5.5.3 细胞毒性分析 |
| 5.5.4 细胞抗氧化活性分析 |
| 5.5.5 肽段对H_2O_2-HepG2细胞氧化损伤的保护作用分析 |
| 5.5.6 细胞内ROS水平分析 |
| 5.6 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（2）真空低温即食海参冻干片工艺研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 海参 |
| 1.2 即食海参的加工技术现状 |
| 1.2.1 传统蒸煮加工技术 |
| 1.2.2 真空低温加工技术 |
| 1.2.3 真空冷冻干燥技术 |
| 1.3 海参风味物质的研究 |
| 1.4 研究目的与意义 |
| 1.5 研究思路与主要内容 |
| 1.5.1 研究思路 |
| 1.5.2 主要内容 |
| 2 盐渍海参超声波/壳聚糖复水工艺研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 原料与仪器设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 盐渍海参前处理方法 |
| 2.3.2 超声波复水方法 |
| 2.3.3 海参复水率与水分含量的测定方法 |
| 2.3.4 海参主要营养成分的测定方法 |
| 2.3.5 海参质构的测定方法 |
| 2.3.6 海参风味成分的测定方法 |
| 2.4 结果分析 |
| 2.4.1 传统水发海参主要成分和质构测定 |
| 2.4.2 壳聚糖浓度对海参营养成分和质构的影响 |
| 2.4.3 超声温度对海参营养成分和质构的影响 |
| 2.4.4 超声时间对海参营养成分和质构的影响 |
| 2.4.5 超声频率对海参营养成分和质构的影响 |
| 2.4.6 复水时间对海参营养成分和质构的影响 |
| 2.5 本章小结 |
| 3 海参真空低温加工工艺研究 |
| 3.1 仪器与设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 加工工艺流程 |
| 3.2.2 加工条件 |
| 3.2.3 即食海参感官评价方法 |
| 3.2.4 海参营养成分与质构的测定方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 真空低温加工对海参外观的影响 |
| 3.3.2 不同加工时间对海参营养成分的影响 |
| 3.3.3 不同加工温度对海参营养成分的影响 |
| 3.3.4 不同加工温度和时间对海参质构的影响 |
| 3.4 真空低温加工工艺优化分析 |
| 3.4.1 工艺设计和结果 |
| 3.4.2 方差和模型的可信度分析 |
| 3.4.3 海参真空低温加工工艺优化 |
| 3.5 不同加工条件对海参挥发性成分的影响 |
| 3.6 本章小结 |
| 4 即食海参冻干片工艺研究 |
| 4.1 仪器与设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 工艺流程 |
| 4.2.2 真空冷冻干燥对海参营养成分的影响 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 不同冻干曲线对海参水分的影响 |
| 4.3.2 不同冻干温度对海参蛋白含量的影响 |
| 4.3.3 不同冻干时间对海参蛋白含量的影响 |
| 4.4 不同冻干曲线对海参质构的影响 |
| 4.5 真空冷冻干燥加工工艺的优化 |
| 4.5.1 工艺设计与结果 |
| 4.5.2 冻干海参总蛋白含量优化 |
| 4.5.3 冻干海参水溶性蛋白的优化 |
| 4.5.4 冻干海参胶原蛋白的优化 |
| 4.5.5 冻干海参水分含量的优化 |
| 4.5.6 真空冷冻干燥加工工艺优化 |
| 4.6 真空冷冻干燥对海参挥发性成分的影响 |
| 4.7 本章小结 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（3）Ⅰ型胶原/大颗粒煅烧骨粉构建软骨组织工程支架最佳比例探索及理化性能初步研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 综述 |
| 1.2.1 组织工程及组织工程支架 |
| 1.2.2 软骨支架材料的分类及其特点 |
| 1.2.3 软骨组织工程修复研究进展 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验设备与材料 |
| 2.1.1 实验设备 |
| 2.1.2 主要材料及试剂 |
| 2.1.3 实验动物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 胶原溶液的制备 |
| 2.2.2 胶原-骨粉支架的制备 |
| 2.2.3 种子细胞的提取 |
| 2.2.4 软骨细胞的荧光染色(DIO 染色) |
| 2.2.5 支架植入小鼠背部 |
| 2.2.6 相关检测(每种比例均选取三个相同形态支架测量后取平均值) |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 外观及微观结构 |
| 3.1.1 纯胶原支架大体观察 |
| 3.1.2 ColⅠ-大颗粒TBC支架大体观察 |
| 3.1.3 ColⅠ-TBC支架SEM扫描结果 |
| 3.2 密度和孔隙率 |
| 3.3 吸水率和弹性模量 |
| 3.4 失重率 |
| 3.5 软骨细胞的形态学观测 |
| 3.6 细胞在支架上的生长凋亡状况 |
| 3.7 小鼠体内支架变化情况 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 研究意义 |
| 4.2 实验难点分析 |
| 4.3 结果分析 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在校期间科研成果 |
| 后记和致谢 |
（4）秸秆预处理对铬革屑胶原蛋白厌氧发酵影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 稻秸、麦秸和铬革屑的组成和特性 |
| 1.3 厌氧发酵技术研究 |
| 1.3.1 厌氧发酵原理 |
| 1.3.2 厌氧发酵技术的主要影响因子 |
| 1.3.3 厌氧发酵装置 |
| 1.3.4 厌氧发酵的微生物组成 |
| 1.4 课题的提出及研究内容 |
| 1.4.1 研究内容 |
| 1.4.2 创新点 |
| 1.4.3 技术路线图 |
| 2 试验材料与方法 |
| 2.1 试验材料与仪器 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 试验仪器及主要试剂 |
| 2.2 试验装置 |
| 2.3 秸秆碱-酶水解试验 |
| 2.3.1 秸秆碱预处理 |
| 2.3.2 纤维素-木聚糖酶水解 |
| 2.4 秸秆水解液与胶原蛋白液厌氧发酵优化试验 |
| 2.4.1 预处理程度秸秆对厌氧发酵产气特性的影响 |
| 2.4.2 碳氮比对厌氧发酵产气特性的影响 |
| 2.5 微生物多样性分析 |
| 2.6 试验测试项目及方法 |
| 2.6.1 试验原料基本理化性质测定 |
| 2.6.2 秸秆水解液还原性糖测定 |
| 2.6.3 秸秆水解液冻干物的红外光谱分析 |
| 2.6.4 秸秆水解液分子量分布的测定 |
| 2.6.5 发酵液SCOD和NH_3-N的测定 |
| 2.6.6 发酵液pH和VFAs的测定 |
| 2.6.7 厌氧发酵产气量和气体组分的测定 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 纤维素-木聚糖酶水解麦秸、稻秸单因素优化试验 |
| 3.1.1 酶比例对秸秆水解的影响 |
| 3.1.2 酶量对秸秆水解的影响 |
| 3.1.3 固液比对秸秆水解的影响 |
| 3.1.4 反应时间对秸秆水解的影响 |
| 3.2 秸秆水解液冻干物分析 |
| 3.2.1 水解液红外光谱分析 |
| 3.2.2 秸秆水解液分子量分布分析 |
| 3.3 秸秆水解液和胶原蛋白液厌氧发酵的产气特性 |
| 3.3.1 碳氮比对稻秸厌氧发酵产气特性的影响 |
| 3.3.2 碳氮比对麦秸厌氧发酵产气特性的影响 |
| 3.4 微生物多样性分析 |
| 3.4.1 Alpha多样性分析 |
| 3.4.2 Beta多样性分析 |
| 3.4.3 不同处理样品门和属水平上的物种组成 |
| 4 结论与展望 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
（5）丝素蛋白仿生组织工程支架的成型、结构与性能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 组织工程支架的特点及研究进展 |
| 1.2.1 组织ECM的组成和结构 |
| 1.2.2 组织工程支架的各向异性 |
| 1.2.3 组织工程支架的层级结构 |
| 1.3 构建组织工程支架的生物材料研究进展 |
| 1.3.1 丝素蛋白及组织工程应用 |
| 1.3.2 细菌纤维素及组织工程应用 |
| 1.3.3 其它生物材料 |
| 1.4 基于静电纺丝的组织工程支架构建技术 |
| 1.4.1 静电纺丝各向异性结构支架 |
| 1.4.2 静电纺丝图案化支架 |
| 1.4.3 静电纺丝3D多孔支架 |
| 1.5 基于3D打印的组织工程支架构建技术 |
| 1.5.1 生物材料3D打印技术简介 |
| 1.5.2 生物材料3D打印墨水的流变性质及可打印性 |
| 1.5.3 3D打印丝素蛋白基组织工程支架的研究进展 |
| 1.6 本论文的研究意义和研究内容 |
| 1.6.1 研究意义 |
| 1.6.2 研究内容 |
| 参考文献 |
| 第2章 静电纺丝素蛋白纤维支架的孔结构调控及梯度结构构筑 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验原料及实验设备 |
| 2.2.1 实验原料 |
| 2.2.2 实验设备 |
| 2.3 实验部分 |
| 2.3.1 RSF纺丝溶液的制备 |
| 2.3.2 低温静电纺RSF纤维毡及其后处理 |
| 2.3.3 不同孔径RSF纤维支架的制备及其后处理 |
| 2.4 测试与表征 |
| 2.4.1 RSF纤维支架的形貌及纤维直径表征 |
| 2.4.2 RSF纤维支架的计算机断层扫描重构 |
| 2.4.3 RSF纤维支架的孔隙率测试 |
| 2.4.4 RSF纤维支架的红外光谱测试 |
| 2.4.5 RSF纤维支架的X射线广角衍射(WAXD)测试 |
| 2.4.6 RSF纤维支架的机械性能测试 |
| 2.4.7 RSF纤维支架的水合度测试 |
| 2.4.8 RSF纤维支架的生物相容性测试 |
| 2.4.9 实验数据统计学分析 |
| 2.5 结果与讨论 |
| 2.5.1 液氮低温接收对RSF静电纺纤维支架形貌的影响 |
| 2.5.2 不同的后处理方式对LTE-RSF纤维支架形貌的影响 |
| 2.5.3 环境湿度对LTE-RSF支架形貌的影响 |
| 2.5.4 接收板温度对LTE-RSF支架形貌的影响 |
| 2.5.5 不同孔径纤维支架的孔尺寸及纤维直径分布分析 |
| 2.5.6 不同孔径纤维支架的二级结构及结晶结构分析 |
| 2.5.7 不同孔径纤维支架的力学性能分析 |
| 2.5.8 不同孔径纤维支架的水合度分析 |
| 2.5.9 不同孔径纤维支架上细胞的增殖及渗透 |
| 2.5.10 梯度孔RSF纤维支架 |
| 2.6 结论 |
| 参考文献 |
| 第3章 3D打印丝素蛋白/明胶/细菌纤维素多级孔组织工程支架 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验原料及实验设备 |
| 3.2.1 实验原料 |
| 3.2.2 实验设备 |
| 3.3 实验部分 |
| 3.3.1 RSF/明胶/BCNFs水凝胶墨水的制备及打印 |
| 3.3.2 RSF/明胶/BCNFs水凝胶墨水的3D打印及支架后处理 |
| 3.4 测试与表征 |
| 3.4.1 BCNFs的形貌及尺寸表征 |
| 3.4.2 RSF/明胶/BCNFs水凝胶墨水的流变测试 |
| 3.4.3 RSF/明胶/BCNFs水凝胶墨水的打印测试 |
| 3.4.4 RSF/明胶/BCNFs打印支架的形貌及孔尺寸表征 |
| 3.4.5 RSF/明胶/BCNFs支架的机械性能测试 |
| 3.4.6 RSF/明胶/BCNFs打印支架的红外光谱测试 |
| 3.4.7 RSF/明胶/BCNFs打印支架的WAXD测试 |
| 3.4.8 RSF/明胶/BCNFs打印支架的溶胀降解性测试 |
| 3.4.9 RSF/明胶/BCNFs打印支架的生物相容性测试 |
| 3.4.10 实验数据统计学分析 |
| 3.5 结果与讨论 |
| 3.5.1 BCNFs的形貌及尺寸分析 |
| 3.5.2 RSF/明胶/BCNFs水凝胶墨水的流变学性能 |
| 3.5.3 RSF/明胶/BCNFs水凝胶墨水的可打印性 |
| 3.5.4 BCNFs对 RSF/明胶/BCNFs打印支架形貌结构的影响 |
| 3.5.5 RSF/明胶/BCNFs打印支架的结构分析 |
| 3.5.6 BCNFs对 RSF/明胶/BCNFs支架力学性能的影响 |
| 3.5.7 RSF/明胶/BCNFs打印支架的吸水溶胀性分析 |
| 3.5.8 体外评价RSF/明胶/BCNFs支架的生物相容性 |
| 3.5.9 RSF/明胶/BCNFs支架的降解性能 |
| 3.6 结论 |
| 参考文献 |
| 第4章 3D打印丝素蛋白/氧化细菌纤维素仿生组织工程支架 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验原料及实验设备 |
| 4.2.1 实验原料 |
| 4.2.2 实验设备 |
| 4.3 实验部分 |
| 4.3.1 TEMPO氧化BCNFs纳米纤维水凝胶制备 |
| 4.3.2 RSF/OBC纳米纤维水凝胶制备 |
| 4.3.3 RSF/OBC水凝胶墨水的3D打印 |
| 4.4 测试与表征 |
| 4.4.1 OBC的形貌表征 |
| 4.4.2 RSF/OBC水凝胶墨水的流变测试 |
| 4.4.3 RSF/OBC水凝胶墨水的可打印性测试 |
| 4.4.4 RSF/OBC打印支架的形貌及孔尺寸表征 |
| 4.4.5 RSF/OBC打印支架的红外光谱测试 |
| 4.4.6 RSF/OBC打印支架的WAXD测试 |
| 4.4.7 RSF/OBC支架的机械性能测试 |
| 4.4.8 RSF/OBC水凝胶的溶胀性测试 |
| 4.4.9 RSF/OBC打印支架的生物相容性测试 |
| 4.4.10 免疫荧光测试 |
| 4.4.11 实验数据统计学分析 |
| 4.5 结果与讨论 |
| 4.5.1 TEMPO氧化的BC纳米纤维表征 |
| 4.5.2 RSF/OBC墨水的流变行为 |
| 4.5.3 RSF/OBC墨水的可打印性 |
| 4.5.4 RSF/OBC打印支架的形貌分析 |
| 4.5.5 RSF/OBC打印支架的二级结构分析 |
| 4.5.6 RSF/OBC打印支架中OBC纳米纤维的取向度分析 |
| 4.5.7 RSF/OBC水凝胶的力学性能分析 |
| 4.5.8 RSF/OBC水凝胶的溶胀性 |
| 4.5.9 RSF/OBC打印支架的生物相容性 |
| 4.6 结论 |
| 参考文献 |
| 第5章 3D打印聚丙烯酰胺/丝素蛋白复合水凝胶应变传感器 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验原料及实验设备 |
| 5.2.1 实验原料 |
| 5.2.2 实验设备 |
| 5.3 实验部分 |
| 5.3.1 SMF微纤维的制备 |
| 5.3.2 复合水凝胶的制备 |
| 5.4 测试与表征 |
| 5.4.1 SMF的形貌尺寸表征 |
| 5.4.2 SMF悬液的Zeta电位测试 |
| 5.4.3 AM/RSF/SMF预凝胶浆料的流变学测试 |
| 5.4.4 PAM/RSF/SMF水凝胶的形貌结构表征 |
| 5.4.5 PAM/RSF/SMF水凝胶的红外光谱测试 |
| 5.4.6 PAM/RSF/SMF水凝胶的力学性能测试 |
| 5.4.7 PAM/RSF/SMF水凝胶的溶胀性测试 |
| 5.4.8 PAM/RSF/SMF水凝胶的应变传感测试 |
| 5.4.9 AM/RSF/SMF(OBC)预凝胶浆料的3D打印 |
| 5.5 结果与讨论 |
| 5.5.1 SMF的形貌结构 |
| 5.5.2 RSF溶液和SMF悬液的Zeta电位 |
| 5.5.3 AM/RSF/SMF预凝胶浆料的流变测试 |
| 5.5.4 双网络复合水凝胶的形成及结构 |
| 5.5.5 PAM/RSF/SMF水凝胶冻干支架的形貌结构 |
| 5.5.6 PAM/RSF/SMF水凝胶的力学性能 |
| 5.5.7 PAM/RSF/SMF水凝胶的溶胀性 |
| 5.5.8 PAM/RSF/SMF水凝胶的传感性 |
| 5.5.9 AM/RSF/SMF预凝胶浆料的可打印性 |
| 5.6 结论 |
| 参考文献 |
| 第6章 全文总结及展望 |
| 6.1 全文总结 |
| 6.2 本论文创新点 |
| 6.3 展望 |
| 附录一 攻读博士学位期间发表的论文及专利 |
| 致谢 |
（6）罗非鱼皮胶原降解反应行为及肽钙螯合物制备研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 罗非鱼养殖及加工现状 |
| 1.1.1 罗非鱼习性及养殖现状 |
| 1.1.2 罗非鱼加工现状 |
| 1.1.3 罗非鱼的下脚料的综合利用 |
| 1.1.4 罗非鱼产业存在的问题及产业转型的迫切性 |
| 1.2 胶原蛋白的研究进展 |
| 1.2.1 胶原蛋白的分类 |
| 1.2.2 胶原蛋白的结构 |
| 1.2.3 胶原蛋白的提取方法 |
| 1.2.4 胶原蛋白的应用 |
| 1.3 胶原明胶化过程 |
| 1.3.1 明胶概述 |
| 1.3.2 明胶结构 |
| 1.3.3 明胶的提取方法 |
| 1.4 胶原明胶化过程的微观结构变化研究 |
| 1.5 鱼明胶及酶解制备胶原蛋白肽 |
| 1.5.1 鱼明胶概况 |
| 1.5.2 鱼明胶的氨基酸组成 |
| 1.5.3 鱼明胶的应用 |
| 1.5.4 胶原蛋白肽的概述 |
| 1.6 胶原蛋白酶性质及酶的分离纯化方法 |
| 1.6.1 胶原蛋白酶性质 |
| 1.6.2 酶的纯化方法 |
| 1.7 胶原蛋白肽含量的检测方法 |
| 1.8 3-D模型构建在蛋白质酶促水解过程的应用研究 |
| 1.9 肽螯合钙的研究进展 |
| 1.9.1 螯合机制 |
| 1.9.2 肽钙螯合物的吸收利用 |
| 1.9.3 生产制备工艺 |
| 1.9.4 肽钙螯合物的特性及促钙吸收的机理 |
| 1.9.5 肽钙螯合物的结合性能分析 |
| 1.9.6 肽钙螯合产品研究 |
| 1.10 本文的研究目的、研究内容 |
| 1.10.1 研究目的及意义 |
| 1.10.2 研究内容 |
| 1.10.3 研究技术路线 |
| 第二章 罗非鱼皮胶原纤维结构及性质研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与仪器 |
| 2.2.1 主要材料和试剂 |
| 2.2.2 主要仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 罗非鱼新鲜鱼皮和鱼鳞基本成分的测定 |
| 2.3.2 鱼皮胶原纤维的分布 |
| 2.3.3 罗非鱼鱼皮、鱼鳞酸溶性胶原(ASC)和酶促酸溶性胶原(PSC)提取方法 |
| 2.3.4 胶原产物性质的测定 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 罗非鱼鱼皮和鱼鳞组成成分的比较 |
| 2.4.2 罗非鱼皮中胶原纤维的分布 |
| 2.4.3 胶原产物纯度的测定结果 |
| 2.4.4 紫外光谱分析 |
| 2.4.5 氨基酸组成分析 |
| 2.4.6 FTIR分析 |
| 2.4.7 胶原热收缩温度测定(Ts) |
| 2.4.8 胶原产物分子量分布测定结果 |
| 2.5 本章小节 |
| 第三章 罗非鱼皮胶原明胶化过程的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与仪器 |
| 3.2.1 主要材料和试剂 |
| 3.2.2 主要仪器与设备 |
| 3.3 实验流程及方法 |
| 3.3.1 盐酸法提取罗非鱼鱼皮明胶化胶原的制备方法 |
| 3.3.2 罗非鱼鱼皮明胶的提取及其提取率计算 |
| 3.3.3 罗非鱼鱼皮胶原基本成分的测定方法 |
| 3.3.4 明胶化胶原的热稳定性分析 |
| 3.3.5 红外光谱分析 |
| 3.3.6 明胶化胶原的圆二色谱分析 |
| 3.3.7 产物亚基组成及分子量分布 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 罗非鱼鱼皮胶原基本成分测定结果 |
| 3.4.2 酸处理时间对明胶提取率的影响 |
| 3.4.3 不同酸处理时间下胶原降解物的红外光谱分析 |
| 3.4.4 酸处理对罗非鱼皮胶原降解物热稳定性的影响 |
| 3.4.5 酸处理罗非鱼皮胶原圆二色谱结果分析 |
| 3.4.6 不同酸处理时间下罗非鱼皮胶原降解物的SDS-PAGE电泳分析 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 双缩脲法测定罗非鱼源胶原蛋白肽含量的改良及应用评价 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与仪器 |
| 4.2.1 材料与试剂 |
| 4.2.2 仪器与设备 |
| 4.3 实验内容和方法 |
| 4.3.1 实验流程 |
| 4.3.2 测定方法最适参数的选定 |
| 4.3.3 最适条件下标准曲线的制作 |
| 4.3.4 精密度实验 |
| 4.3.5 重复性实验 |
| 4.3.6 鱼皮胶原蛋白肽的加样回收率试验 |
| 4.3.7 鱼皮胶原蛋白肽与罗非鱼皮胶原蛋白的加样回收率试验 |
| 4.3.8 不同种类的罗非鱼胶原蛋白肽加样回收率试验 |
| 4.3.9 不同种类罗非鱼胶原蛋白肽与罗非鱼皮胶原蛋白的加样回收率试验 |
| 4.3.10 数据及图片处理方法 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 络合物最大吸收波长的确定 |
| 4.4.2 多肽线性质量浓度范围的确定 |
| 4.4.3 最适pH的确定 |
| 4.4.4 最适TCA浓度的确定 |
| 4.4.5 最适条件下标准曲线的绘制 |
| 4.4.6 精密度试验结果分析 |
| 4.4.7 重复性试验结果分析 |
| 4.4.8 鱼皮胶原蛋白肽的加样回收率试验结果分析 |
| 4.4.9 鱼皮胶原蛋白肽与胶原蛋白的加样回收率试验结果分析 |
| 4.4.10 不同种类的罗非鱼胶原蛋白肽及加罗非鱼胶原蛋白的加样回收率试验结果分析 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 胶原蛋白水解酶的纯化鉴定、酶学性质及固定化研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与仪器 |
| 5.2.1 主要材料与试剂 |
| 5.2.2 仪器与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 酶的纯化及鉴定 |
| 5.3.2 胶原蛋白水解酶酶学性质研究 |
| 5.3.3 磺化聚苯乙烯纳米球固定胶原蛋白水解酶及表征 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 胶原蛋白水解酶的分离、纯化与鉴定 |
| 5.4.2 胶原蛋白水解酶酶学性质研究 |
| 5.4.3 磺化聚苯乙烯(SPS)纳米球固定胶原蛋白水解酶及表征 |
| 5.5 本章小节 |
| 第六章 罗非鱼皮胶原蛋白酶解过程反应行为研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与仪器 |
| 6.2.1 主要材料与试剂 |
| 6.2.2 主要仪器与设备 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 酶解体系的建立 |
| 6.3.2 水解度的测定 |
| 6.3.3 酶解体系物质分子量分布的测定 |
| 6.3.4 3-D图形构建与曲面方程拟合及验证 |
| 6.3.5 不同水解度下酶解物的抗氧化能力评价 |
| 6.3.6 罗非鱼皮明胶化胶原蛋白肽的HPLC-MSMS检测方法及序列分析 |
| 6.3.7 鉴定得到的肽序列结构的模拟 |
| 6.4 结果与分析 |
| 6.4.1 酶解反应动态特征3-D模型构建 |
| 6.4.2 罗非鱼皮明胶化胶原酶解产物的抗氧化能力评价 |
| 6.4.3 罗非鱼皮明胶化胶原酶解产物肽的序列分析及结构预测 |
| 6.5 小结 |
| 第七章 罗非鱼皮胶原蛋白肽-钙螯合物的制备及体外Caco-2细胞模型促钙吸收评价 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 材料与仪器 |
| 7.2.1 主要材料与试剂 |
| 7.2.2 仪器与设备 |
| 7.3 实验方法 |
| 7.3.1 罗非鱼皮胶原蛋白肽分子量的测定方法 |
| 7.3.2 罗非鱼皮胶原蛋白肽中钙含量的测定 |
| 7.3.3 罗非鱼皮胶原蛋白肽-钙螯合物基本制备方法 |
| 7.3.4 罗非鱼皮胶原蛋白肽-钙螯合物制备工艺优化 |
| 7.3.5 钙螯合率的测定 |
| 7.3.6 胶原蛋白肽螯合钙的结构表征 |
| 7.3.7 罗非鱼皮胶原蛋白肽钙螯合物的稳定性研究 |
| 7.3.8 罗非鱼鱼鳞肽钙螯合物中钙结合量的测定方法 |
| 7.4 结果与讨论 |
| 7.4.1 罗非鱼皮胶原蛋白肽分子量分布测定结果 |
| 7.4.2 罗非鱼胶原蛋白肽含钙量的测定结果 |
| 7.4.3 罗非鱼皮胶原蛋白肽钙螯合物制备工艺单因素实验结果及分析 |
| 7.4.4 罗非鱼皮胶原蛋白肽钙螯合物制备工艺响应面优化试验结果及分析 |
| 7.4.5 胶原蛋白肽钙螯合物结构表征 |
| 7.4.6 罗非鱼皮胶原蛋白肽钙螯合物稳定性研究 |
| 7.4.7 罗非鱼皮胶原蛋白肽钙螯合物体外促钙吸收效果 |
| 7.5 本章小节 |
| 结论与展望 |
| 一、结论 |
| 二、主要创新点 |
| 三、展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（7）人工虫草CPD0300活性组分对糖尿病肾病的治疗作用及其制剂研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 1. 糖尿病肾病 |
| 1.1 糖尿病肾病的流行病学 |
| 1.2 糖尿病肾病的病情进展 |
| 1.3 糖尿病肾病的发病机制 |
| 2. 冬虫夏草 |
| 2.1 冬虫夏草的药理作用 |
| 2.2 冬虫夏草的活性成分 |
| 3. 本课题的研究意义和设计思路 |
| 参考文献 |
| 第一部分 人工虫草CPD0300菌粉体外抗糖尿病肾病活性部位的筛选 |
| 前言 |
| 第一章 提取工艺的考察 |
| 一、实验材料 |
| 1.1 药品和试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验细胞 |
| 二、实验方法 |
| 2.1 供试品的制备和试剂的配制 |
| 2.2 体外活性评价 |
| 2.3 统计学分析 |
| 三、结果 |
| 3.1 不同工艺提取物对RMC细胞活力的影响 |
| 3.2 不同工艺提取物对ECM表达的抑制作用 |
| 四、讨论 |
| 五、本章小结 |
| 第二章 人工虫草CPD0300菌粉各组分分离纯化及抗糖尿病肾病活性筛选 |
| 一、实验材料 |
| 1.1 药品和试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验细胞 |
| 二、实验方法 |
| 2.1 多糖的分离纯化及鉴别 |
| 2.2 核苷类组分的分离纯化及成分分析 |
| 2.3 甾醇类组分的分离纯化及成分分析 |
| 2.4 各组分抗糖尿病肾病活性筛选 |
| 2.5 统计学分析 |
| 三、结果 |
| 3.1 多糖的质量评价 |
| 3.2 核苷提取物的成分分析 |
| 3.3 甾醇提取物的成分分析 |
| 3.4 各组分抗糖尿病肾病活性筛选 |
| 四、讨论 |
| 五、本章小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 人工虫草活性组分对糖尿病肾病的治疗作用及机制研究 |
| 前言 |
| 第三章 核苷提取物对糖尿病肾病的治疗作用及机制研究 |
| 一、实验材料 |
| 1.1 药品和试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 细胞和动物 |
| 二、实验方法 |
| 2.1 试剂配制 |
| 2.2 糖尿病模型小鼠的建立及分组 |
| 2.3 肾功能指标的测定 |
| 2.4 肾脏组织病理检查 |
| 2.5 细胞培养和给药 |
| 2.6 Western blot法测定蛋白表达 |
| 2.7 RT-PCR测定mRNA表达 |
| 2.8 统计学分析 |
| 三、实验结果 |
| 3.1 核苷提取物对糖尿病肾病小鼠体重和血糖的影响 |
| 3.2 核苷提取物对糖尿病肾病小鼠肾功能的影响 |
| 3.3 核苷提取物对糖尿病肾病小鼠肾脏组织病理变化的影响 |
| 3.4 核苷提取物对上皮间质转分化的影响 |
| 3.5 核苷提取物对细胞外基质积聚的影响 |
| 3.6 核苷提取物通过p38/ERK通路抑制EMT和ECM积累 |
| 四、讨论 |
| 五、本章小结 |
| 第四章 麦角甾醇对糖尿病肾病的治疗作用及机制研究 |
| 一、实验材料 |
| 1.1 药品和试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 细胞和动物 |
| 二、实验方法 |
| 2.1 试剂配制 |
| 2.2 糖尿病模型小鼠的建立及分组 |
| 2.3 代谢参数和肾功能参数的测定 |
| 2.4 肾脏组织病理检查 |
| 2.5 细胞培养和给药 |
| 2.6 MTT法测定细胞增殖 |
| 2.7 Western blot法测定蛋白表达 |
| 2.8 RT-PCR测定mRNA表达 |
| 2.9 统计学分析 |
| 三、实验结果 |
| 3.1 麦角甾醇对糖尿病肾病小鼠体重和血糖的影响 |
| 3.2 麦角甾醇对糖尿病肾病小鼠肾功能参数的影响 |
| 3.3 麦角甾醇对糖尿病肾病小鼠肾脏组织病理变化的影响 |
| 3.4 麦角甾醇对糖尿病状态下肾系膜细胞增殖的影响 |
| 3.5 麦角甾醇对糖尿病状态下细胞外基质积聚的影响 |
| 3.6 麦角甾醇通过TGF-β1/Smad2通路抑制肾系膜细胞增殖和ECM积聚 |
| 四、讨论 |
| 五、本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 人工虫草改良制剂的制备及其在大鼠体内的药物动力学研究 |
| 前言 |
| 第五章 人工虫草改良制剂的制备及其在大鼠体内的药物动力学研究 |
| 一、实验材料 |
| 1.1 药品和试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验动物 |
| 二、实验方法 |
| 2.1 麦角甾醇在不同增溶溶液中的溶解度测定 |
| 2.2 血浆中麦角甾醇含量测定方法的建立 |
| 2.3 药物动力学实验 |
| 2.4 统计学分析 |
| 三、实验结果 |
| 3.1 麦角甾醇在不同增溶溶液中的溶解度 |
| 3.2 血浆中麦角甾醇含量测定方法的建立 |
| 3.3 药物动力学实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、本章小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 麦角甾醇纳米脂质载体的制备和评价 |
| 前言 |
| 第六章 麦角甾醇纳米脂质载体制备工艺的研究 |
| 一、实验材料 |
| 1.1 药品和试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 二、实验方法 |
| 2.1 ERG-NLCs含量测定方法的建立 |
| 2.2 包封率和载药量测定方法的建立 |
| 2.3 ERG-NLCs制备方法的考察 |
| 2.4 ERG-NLCs最优处方的验证及质量评价 |
| 三、实验结果 |
| 3.1 ERG-NLCs含量测定方法的建立 |
| 3.2 包封率和载药量测定方法的建立 |
| 3.3 ERG-NLCs制备方法的考察 |
| 3.4 ERG-NLCs最优处方的验证及质量评价 |
| 四、讨论 |
| 五、本章小结 |
| 第七章 麦角甾醇纳米脂质载体冻干制剂的研究 |
| 一、实验材料 |
| 1.1 药品和试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 二、实验方法 |
| 2.1 冻干工艺的确定 |
| 2.2 冻干产品的评价 |
| 三、实验结果 |
| 3.1 冻干工艺的确定 |
| 3.2 冻干产品的评价 |
| 四、讨论 |
| 五、本章小结 |
| 第八章 麦角甾醇纳米脂质载体的体内药物动力学和体外药效评价 |
| 一、实验材料 |
| 1.1 药品和试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 细胞和动物 |
| 二、实验方法 |
| 2.1 血浆中麦角甾醇含量测定方法的建立 |
| 2.2 药物动力学实验 |
| 2.3 细胞培养 |
| 2.4 MTT法测定细胞毒性 |
| 2.5 MTT法测定细胞增殖 |
| 2.6 Western blot法测定蛋白表达 |
| 2.7 统计学分析 |
| 三、实验结果 |
| 3.1 血浆中麦角甾醇含量测定方法的建立 |
| 3.2 药物动力学实验结果 |
| 3.3 ERG-NLCs的细胞毒性 |
| 3.4 ERG-NLCs对高糖诱导的RMC细胞增殖抑制作用 |
| 3.5 ERG-NLCs对高糖诱导的RMC细胞ECM积聚的影响 |
| 四、讨论 |
| 五、本章小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（8）牦牛头蹄脱毛工艺及其胶原蛋白的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩写词表(Abbreviations) |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 牦牛资源利用现状 |
| 1.1.1 牦牛肉 |
| 1.1.2 牦牛皮 |
| 1.1.3 牦牛奶 |
| 1.2 脱毛工艺研究现状 |
| 1.2.1 现有脱毛工艺 |
| 1.2.2 现有脱毛工艺存在的问题 |
| 1.3 胶原蛋白研究现状 |
| 1.3.1 胶原蛋白提取方法 |
| 1.3.2 胶原蛋白的应用 |
| 1.4 胶原蛋白肽研究现状 |
| 1.4.1 胶原蛋白肽的制备方法 |
| 1.4.2 胶原蛋白肽的生物活性 |
| 1.5 本课题研究目的及内容 |
| 1.6 技术路线图 |
| 第二章 牦牛头、蹄复合酶法脱毛工艺优化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与仪器 |
| 2.2.1 材料与试剂 |
| 2.2.2 仪器与设备 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 牛皮预处理 |
| 2.3.2 酶法脱毛工艺流程 |
| 2.3.3 单酶脱毛筛选 |
| 2.3.4 复合酶脱毛单因素试验 |
| 2.3.5 响应面法优化复合酶脱毛工艺参数 |
| 2.3.6 脱毛液中各成分含量的测定 |
| 2.3.7 脱毛效果综合评分 |
| 2.3.8 牦牛皮不同部位基本组分测定 |
| 2.3.9 HE染色 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 单酶筛选实验 |
| 2.4.2 复合酶脱毛单因素实验 |
| 2.4.3 响应面优化复合酶脱毛工艺参数 |
| 2.5 HE染色分析 |
| 2.6 基本组分分析成分分析 |
| 2.7 小结 |
| 第三章 酶法提取牦牛皮胶原蛋白 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与试剂 |
| 3.2.1 材料与仪器 |
| 3.2.2 仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 牦牛皮胶原蛋白提取工艺流程 |
| 3.3.2 酶提取法制备牦牛皮胶原蛋白单因素试验 |
| 3.3.3 响应面法优化牦牛皮胶原蛋白提取工艺参数 |
| 3.3.4 牦牛皮胶原蛋白提取率测定 |
| 3.3.5 牦牛皮胶原蛋白结构表征 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 酶提取法制备牦牛皮胶原蛋白单因素试验 |
| 3.4.3 响应面法优化酶法提取牦牛皮胶原蛋白工艺参数 |
| 3.4.4 牦牛皮胶原蛋白结构表征 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 牦牛皮胶原蛋白制备抗氧化活性肽 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与仪器 |
| 4.2.1 材料与试剂 |
| 4.2.2 仪器与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 牦牛皮胶原抗氧化肽的制备工艺流程 |
| 4.3.2 计算机模拟蛋白酶水解蛋白质 |
| 4.3.3 单因素实验 |
| 4.3.4 响应面法优化复合酶制备牦牛皮抗氧化肽的工艺参数 |
| 4.3.5 自由基清除能力测定 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 计算机模拟酶切 |
| 4.4.2 复合酶水解牦牛皮胶元蛋白单因素筛选 |
| 4.4.3 响应面优化复合酶制备牦牛皮胶原蛋白肽 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 攻读学位期间所发表的学术论文论目录 |
（9）罗伊氏乳杆菌冻干保护剂的筛选及在发酵乳中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 罗伊氏乳杆菌的生物学特性 |
| 1.1.1 罗伊氏乳杆菌的生理学特性 |
| 1.1.2 罗伊氏乳杆菌的耐酸耐胆盐能力 |
| 1.1.3 罗伊氏乳杆菌的益生功能 |
| 1.1.4 罗伊氏乳杆菌F-9-35 的生物学和益生特性 |
| 1.2 益生菌的真空冷冻干燥技术 |
| 1.2.1 真空冷冻干燥技术的原理和优点 |
| 1.2.2 真空冷冻干燥对菌体的损伤 |
| 1.3 乳酸菌冻干保护剂的研究进展 |
| 1.3.1 冻干保护剂的种类 |
| 1.3.2 冻干保护剂的选择 |
| 1.4 罗伊氏乳杆菌发酵乳的研究进展 |
| 1.5 本研究的目的与意义 |
| 1.6 本研究的主要内容 |
| 1.7 本研究的技术路线 |
| 第2章 罗伊氏乳杆菌F-9-35 生物学性质研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 活菌计数 |
| 2.3.2 传代稳定性 |
| 2.3.3 生长曲线测定 |
| 2.3.4 耐酸实验 |
| 2.3.5 耐胆盐实验 |
| 2.3.6 数据处理 |
| 2.4 实验结果与讨论 |
| 2.4.1 罗伊氏乳杆菌F-9-35 传代测序结果 |
| 2.4.2 罗伊氏乳杆菌F-9-35 生长曲线测定结果 |
| 2.4.3 罗伊氏乳杆菌F-9-35 耐酸能力 |
| 2.4.4 罗伊氏乳杆菌F-9-35 耐胆盐能力 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 罗伊氏乳杆菌F-9-35 冻干保护剂的筛选 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 试验方法 |
| 3.3.1 罗伊氏乳杆菌F-9-35 冻干保护条件优化 |
| 3.3.2 不同冻干保护剂添加量对存活率的影响 |
| 3.3.3 响应面试验优化冻干保护剂配方 |
| 3.3.4 数据处理 |
| 3.4 实验结果与讨论 |
| 3.4.1 冻干条件对存活率的影响 |
| 3.4.2 冻干保护剂添加量对存活率的影响 |
| 3.4.3 响应面试验优化结果与分析 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 罗伊氏乳杆菌F-9-35冻干菌粉模拟胃肠液耐受性实验和贮存稳定性研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与仪器 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 试验方法 |
| 4.3.1 罗伊氏乳杆菌 F-9-35 冻干菌粉人工模拟胃液耐受性实验 |
| 4.3.2 罗伊氏乳杆菌 F-9-35 冻干菌粉人工模拟肠液耐受性实验 |
| 4.3.3 罗伊氏乳杆菌F-9-35 冻干菌粉贮存稳定性 |
| 4.3.4 数据处理 |
| 4.4 实验结果与讨论 |
| 4.4.1 罗伊氏乳杆菌F-9-35 冻干菌粉在人工模拟胃液中的耐受性 |
| 4.4.2 罗伊氏乳杆菌F-9-35 冻干菌粉在人工模拟肠液中的耐受性 |
| 4.4.3 罗伊氏乳杆菌F-9-35 冻干菌粉不同贮存温度下活菌数的变化 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 罗伊氏乳杆菌F-9-35 在发酵乳制备中的应用 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与设备 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 实验仪器 |
| 5.3 试验方法 |
| 5.3.1 罗伊氏乳杆菌F-9-35 对发酵乳指标的影响 |
| 5.3.2 传统发酵剂对发酵乳指标的影响 |
| 5.3.3 发酵温度对混合发酵乳指标的影响 |
| 5.3.4 发酵乳pH的测定 |
| 5.3.5 发酵乳酸度的测定 |
| 5.3.6 发酵乳持水力的测定 |
| 5.3.7 发酵乳质构的测定 |
| 5.3.8 发酵乳粘度的测定 |
| 5.3.9 发酵乳活菌数的测定 |
| 5.4 实验结果与讨论 |
| 5.4.1 罗伊氏乳杆菌F-9-35 对发酵乳指标的影响 |
| 5.4.2 传统发酵剂对发酵乳指标的影响 |
| 5.4.3 发酵温度对混合发酵乳指标的影响 |
| 5.4.4 贮存时间对发酵乳指标的影响 |
| 5.5 本章小结 |
| 第6章 结论 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（10）基于丝素蛋白墨水材料的挤出式生物三维打印技术的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 生物三维打印概述 |
| 1.1.1 生物三维打印简介 |
| 1.1.2 生物三维打印技术研究进展 |
| 1.2 生物墨水 |
| 1.2.1 生物墨水及其重要参数 |
| 1.2.2 生物墨水材料来源 |
| 1.3 丝素蛋白材料生物三维打印 |
| 1.3.1 丝素蛋白概述 |
| 1.3.2 丝素蛋白水凝胶 |
| 1.3.3 不同交联方式在丝素蛋白材料生物三维打印上的应用 |
| 1.4 本论文研究的目的和主要内容 |
| 第二章 纯丝素蛋白墨水材料可打印性的初步研究 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.1.1 实验所用试剂与材料 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 丝素蛋白水溶液的制备 |
| 2.2.2 丝素蛋白电凝胶的制备 |
| 2.2.3 去除丝素蛋白电凝胶内部气泡两种方案 |
| 2.2.4 去除气泡前后电凝胶冻干支架的微观形貌观察 |
| 2.2.5 去除气泡前后电凝胶冻干支架压缩力学性能测试 |
| 2.2.6 傅里叶变换红外全反射光谱测试(FTIR-ATR) |
| 2.2.7 X射线衍射(XRD) |
| 2.2.8 流变性能测试 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 去除电凝胶内部气泡两种方案比较分析 |
| 2.3.2 去除气泡前后电凝胶冻干支架的微观形貌观察(SEM) |
| 2.3.3 冻干支架压缩力学性能的测试 |
| 2.3.4 流变性能的分析 |
| 2.3.5 温度对纯丝素蛋白墨水材料流变性能的影响 |
| 2.3.6 温度对纯丝素蛋白墨水材料蛋白质二级结构的影响 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 电凝胶温敏特性机理的初步研究 |
| 3.1 实验材料与仪器 |
| 3.1.1 实验所用试剂与材料 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 样品的制备 |
| 3.2.2 不同丝素溶胶凝胶的微观形貌观察 |
| 3.2.3 原子力显微镜测试 |
| 3.2.4 凝胶时间的测定 |
| 3.2.5 傅里叶变换红外全反射光谱测试(FTIR-ATR) |
| 3.2.6 X射线衍射(XRD) |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 丝素蛋白在不同状态下的SEM分析 |
| 3.3.2 丝素蛋白在不同状态下的AFM分析 |
| 3.3.3 丝素蛋白不同状态下的FTIR分析 |
| 3.3.4 丝素蛋白溶液的吸光度值随时间的变化 |
| 3.4 电凝胶温敏特性机理的初步猜想 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 纯丝素蛋白墨水材料的3D打印 |
| 4.1 实验材料与仪器 |
| 4.1.1 实验所用试剂与材料 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 打印参数的设置 |
| 4.2.2 纯丝素蛋白墨水材料3D打印支架的微观形貌观察 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 去除气泡后处理对三维打印支架宏观结构的影响 |
| 4.3.2 打印喷头的压力和温度对丝素蛋白墨水三维打印的控制 |
| 4.3.3 打印平台温度对丝素蛋白墨水三维打印的控制 |
| 4.3.4 打印填充间距对丝素蛋白墨水三维打印的控制及其压缩力学性能的影响 |
| 4.3.5 打印高度对三维打印丝素蛋白支架结构的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 纯丝素蛋白3D打印支架对细胞行为的影响 |
| 5.1 实验材料与仪器 |
| 5.1.1 实验所用试剂与材料 |
| 5.1.2 实验仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 丝素蛋白冻干支架的制备 |
| 5.2.2 冻干支架的生物性能表征 |
| 5.2.3 丝素凝胶冻干支架的微观形貌观察 |
| 5.2.4 冻干支架压缩力学性能测试 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 激光共聚焦显微镜分析 |
| 5.3.2 扫描电子显微镜分析 |
| 5.3.3 细胞活性MTT实验分析 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士期间完成的论文 |
| 致谢 |
四、胶原最佳冻干浓度的选择（论文参考文献）
- [1]海蜇胶原抗氧化肽的制备分离、结构解析及活性研究[D]. 冯玲玲. 哈尔滨商业大学, 2021(12)
- [2]真空低温即食海参冻干片工艺研究[D]. 杨青. 烟台大学, 2021(12)
- [3]Ⅰ型胶原/大颗粒煅烧骨粉构建软骨组织工程支架最佳比例探索及理化性能初步研究[D]. 白宇鑫. 吉林大学, 2021(01)
- [4]秸秆预处理对铬革屑胶原蛋白厌氧发酵影响的研究[D]. 蒋术林. 陕西科技大学, 2021(09)
- [5]丝素蛋白仿生组织工程支架的成型、结构与性能研究[D]. 黄利. 东华大学, 2020(03)
- [6]罗非鱼皮胶原降解反应行为及肽钙螯合物制备研究[D]. 张玲. 华南理工大学, 2020(02)
- [7]人工虫草CPD0300活性组分对糖尿病肾病的治疗作用及其制剂研究[D]. 董中华. 山东大学, 2020(08)
- [8]牦牛头蹄脱毛工艺及其胶原蛋白的初步研究[D]. 耿嘉宝. 兰州理工大学, 2021(01)
- [9]罗伊氏乳杆菌冻干保护剂的筛选及在发酵乳中的应用[D]. 赵禹彤. 吉林大学, 2020(08)
- [10]基于丝素蛋白墨水材料的挤出式生物三维打印技术的研究[D]. 陈晓敏. 苏州大学, 2020(02)